美登木素抑制鼻咽癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及其機(jī)理研究.pdf

1、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是高發(fā)于中國(guó)南方尤其廣東地區(qū)的惡性腫瘤。針對(duì)早期和局部晚期鼻咽癌患者，目前主要的治療方式是化療或者放化療，這類患者的5年生存率可達(dá)到85％。但是，仍然有部分患者由于發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)而導(dǎo)致治療失敗。含鉑的雙藥化療是治療局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。但是該方案存在緩解持續(xù)時(shí)間短，并發(fā)癥較多等局限。因此尋找新的治療方法和藥物以減少并發(fā)癥并提高局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)

2、移鼻咽癌患者的生存期仍然是亟待解決的臨床問(wèn)題。
　　隨著抗體-藥物偶聯(lián)物(Antibody-drug conjugate，ADC)技術(shù)的完善，一批抗腫瘤作用強(qiáng)，但具有一定毒性的藥物又重新得到了關(guān)注。美登木素是抗體-藥物偶聯(lián)物中應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞毒性藥物。在本研究中，我們將探討美登木素對(duì)鼻咽癌生物學(xué)功能的影響。
　　首先我們通過(guò)生物信息學(xué)分析了美登木素相關(guān)的基因芯片，該芯片包含分別經(jīng)T-DM1(trastuzumab-emtan

3、sine，曲妥珠單抗-美登木素偶聯(lián)藥物)以及trastuzumab曲妥珠單抗處理的乳腺癌組織。通過(guò)比對(duì)兩組不同的芯片，我們可以得出美登木素衍生物DM1會(huì)影響乳腺癌細(xì)胞哪些基因的表達(dá)。最終我們發(fā)現(xiàn)DM1可以顯著抑制乳腺癌細(xì)胞中EMT相關(guān)基因的表達(dá)。相關(guān)研究亦表明，美登木素可以抑制乳腺癌細(xì)胞株EMT的發(fā)生?；诖?，我們進(jìn)一步探索美登木素是否抑制了鼻咽癌細(xì)胞EMT的發(fā)生。
　　通過(guò)MTT、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、周期實(shí)驗(yàn)以及相關(guān)周期蛋白的檢測(cè)

4、、裸鼠皮下成瘤，我們初步證實(shí)了美登木素顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞體內(nèi)外的增殖能力。隨后，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell以及Boyden，我們證實(shí)美登木素可以顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞株侵襲遷移能力。因此，EMT的表型受到了美登木素的顯著影響。由此，進(jìn)一步通過(guò)Western blot檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)上皮性質(zhì)相關(guān)的標(biāo)記物E-cadherin顯著升高，而間充質(zhì)細(xì)胞性質(zhì)相關(guān)的標(biāo)記物N-cadherin以及Vimentin標(biāo)記物降低。由此說(shuō)明鼻咽

5、癌細(xì)胞在美登木素作用下，EMT受到抑制并降低了細(xì)胞的侵襲遷移能力。腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及藥物抗性的重要原因，因此我們進(jìn)一步檢測(cè)美登木素對(duì)鼻咽癌細(xì)胞腫瘤球形成能力的影響。我們發(fā)現(xiàn)腫瘤球大小以及數(shù)目受到美登木素的顯著抑制，蛋白檢測(cè)同樣表明腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物受到顯著抑制。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們認(rèn)為，美登木素通過(guò)抑制鼻咽癌細(xì)胞EMT以抑制其侵襲遷移以及腫瘤干細(xì)胞的增殖。
　　基于EMT在美登木素對(duì)鼻咽癌生物學(xué)功能的影響中居于核

6、心地位，隨后我們進(jìn)一步利用生物信息學(xué)分析了美登木素抑制鼻咽癌細(xì)胞EMT的機(jī)制。結(jié)果表明，美登木素可能通過(guò)SMAD2抑制鼻咽癌細(xì)胞的EMT。綜合以上結(jié)果，美登木素通過(guò)抑制鼻咽癌細(xì)胞EMT的發(fā)生，進(jìn)而抑制其侵襲遷移和腫瘤干細(xì)胞增殖。其機(jī)制可能是通過(guò)影響SMAD2信號(hào)通路從而抑制鼻咽癌細(xì)胞的EMT?；诖?，我們認(rèn)為美登木素可以作為潛在的治療發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者的有效化療藥物。而將美登木素與相關(guān)抗體結(jié)合將更加有效的治療該類鼻咽癌患者