CCL21-CCR7軸刺激乳腺癌細胞上皮間充質轉化介導腫瘤細胞的侵襲與定向遷移.pdf

1、研究背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，癌細胞的侵襲與轉移是導致患者治療后復發(fā)的關鍵因素。近年來，趨化因子受體CCR7在惡性腫瘤的表達和作用受到關注。例如:乳腺癌、胃癌、食管癌、甲狀腺乳頭狀癌等許多腫瘤表達CCR7，而且其表達強度與淋巴結轉移有密切關系。CCR7的配體為次級淋巴組織趨化因子19/21(CCL19/CCL21)，后者特異性的表達于次級淋巴組織，如淋巴結、派伊爾集合淋巴結(peyer's patches，PP)、脾以及淋

2、巴管內皮細胞等。因此，CCR7及其配體CCL19/CCL21被公認為特異性誘導腫瘤細胞向淋巴結轉移。然而至今，CCL21/CCR7調控腫瘤細胞向淋巴結遷移的分子機制尚不清楚。
　　癌細胞發(fā)生上皮細胞-間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腫瘤領域近些年的研究熱點。其主要特征是癌細胞的上皮細胞表型減少、間質細胞表型增加，從而獲得侵襲、遷移能力。因此，EMT在腫瘤細胞發(fā)生淋巴結或血液

3、轉移中發(fā)揮關鍵作用。CCL21/CCR7在調控腫瘤細胞向淋巴結遷移過程中是否伴有EMT發(fā)生？在本文研究之前，國內、外均未見報道。本文以乳腺癌作為研究目標，假設CCL21/CCR7軸啟動EMT程序誘發(fā)癌細胞向淋巴結定向遷移。
　　實驗目的:探究CCL21/CCR7軸是否能夠誘導乳腺癌細胞EMT，從而促進乳腺癌細胞的淋巴結轉移。
　　材料和方法:
　　1.收集60例女性乳腺癌患者的原位癌組織石蠟塊并制作切片，應用免疫組織化

4、學方法檢測CCR7和EMT相關標志物N-cadherin、Slug的表達情況。
　　2.用CCL21分別刺激乳腺癌細胞株1428、MCF-7和MDA-MB-231各48h，然后采用Real time PCR和Western blot技術檢測細胞株對CCR7和EMT標志物E-cadherin、N-cadherin、Slug、Vimentin的表達情況;分別采用創(chuàng)傷愈合實驗和Matrigel侵襲實驗檢測CCL21/CCR7軸對乳腺痛細

5、胞遷移和侵襲能力的影響。
　　3.采用脂質體轉染技術，將質粒CCR7-shRNA(17428，17432)及其相應的空白質粒NC-shRNA轉染MCF-7、MDA-MB-231細胞，沉默乳腺痛細胞的CCR7基因;CCL21分別刺激各轉染細胞，Western blot技術檢測轉染組細胞CCR7和EMT標志物的表達情況;分別采用創(chuàng)傷愈合實驗和Matrigel侵襲實驗檢測CCL21/CCR7軸對轉染細胞遷移和侵襲能力的影響。
　　

6、4.運用統(tǒng)計學分析軟件包SPSS17.0對以上實驗結果進行統(tǒng)計學分析。
　　結果:
　　1.免疫組化染色顯示，乳腺癌患者的原位癌組織中CCR7、N-cadherin、Slug呈高表達，表達率分別為60％(36/60)、76.67％(46/60)、65％(40/60)，而且表達強度與淋巴結轉移與否和臨床病理分期有密切關系。另外，CCR7表達與N-cadherin、Slug表達呈正相關。
　　2.CCL21刺激細胞株后，細

7、胞的E-cadherin蛋白和mRNA表達水平下降，而CCR7、N-cadherin、Slug、Vimentin蛋白和mRNA表達水平上升;同時，乳腺癌細胞的遷移和侵襲數目均增加。
　　3.沉默乳腺癌細胞株的CCR7基因，再用CCL21刺激癌細胞，與對照組比較，細胞對E-cadherin、N-cadherin、Slug、Vimentin的表達沒有發(fā)生變化，即CCL21誘導的EMT受到抑制;癌細胞向CCL21區(qū)的遷移和侵襲數目明顯減

8、少。
　　結論:CCR7、N-cadherin和Slug在乳腺癌組織高表達，并與淋巴轉移有密切關系;CCL21/CCR7軸能夠誘發(fā)乳腺癌細胞EMT，并由此促進乳腺癌細胞侵襲與向配體區(qū)域的定向遷移。
　　意義:本文在國內、外首次研究CCL21/CCR7對乳腺癌細胞EMT的誘導作用，探尋其促進癌細胞定向遷移的分子機制。研究成果將對于闡明CCL21/CCR7促進腫瘤淋巴轉移的分子機制、尋找其關鍵分子以選擇有效的靶向治療于段等奠定基