CCL21-CCR7軸刺激乳腺癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲與定向遷移.pdf

1、研究背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者治療后復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素。近年來(lái)，趨化因子受體CCR7在惡性腫瘤的表達(dá)和作用受到關(guān)注。例如:乳腺癌、胃癌、食管癌、甲狀腺乳頭狀癌等許多腫瘤表達(dá)CCR7，而且其表達(dá)強(qiáng)度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。CCR7的配體為次級(jí)淋巴組織趨化因子19/21(CCL19/CCL21)，后者特異性的表達(dá)于次級(jí)淋巴組織，如淋巴結(jié)、派伊爾集合淋巴結(jié)(peyer's patches，PP)、脾以及淋

2、巴管內(nèi)皮細(xì)胞等。因此，CCR7及其配體CCL19/CCL21被公認(rèn)為特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。然而至今，CCL21/CCR7調(diào)控腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)遷移的分子機(jī)制尚不清楚。
　　癌細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腫瘤領(lǐng)域近些年的研究熱點(diǎn)。其主要特征是癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞表型減少、間質(zhì)細(xì)胞表型增加，從而獲得侵襲、遷移能力。因此，EMT在腫瘤細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)或血液

3、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。CCL21/CCR7在調(diào)控腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)遷移過(guò)程中是否伴有EMT發(fā)生？在本文研究之前，國(guó)內(nèi)、外均未見報(bào)道。本文以乳腺癌作為研究目標(biāo)，假設(shè)CCL21/CCR7軸啟動(dòng)EMT程序誘發(fā)癌細(xì)胞向淋巴結(jié)定向遷移。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探究CCL21/CCR7軸是否能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞EMT，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。
　　材料和方法:
　　1.收集60例女性乳腺癌患者的原位癌組織石蠟塊并制作切片，應(yīng)用免疫組織化

4、學(xué)方法檢測(cè)CCR7和EMT相關(guān)標(biāo)志物N-cadherin、Slug的表達(dá)情況。
　　2.用CCL21分別刺激乳腺癌細(xì)胞株1428、MCF-7和MDA-MB-231各48h，然后采用Real time PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞株對(duì)CCR7和EMT標(biāo)志物E-cadherin、N-cadherin、Slug、Vimentin的表達(dá)情況;分別采用創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCL21/CCR7軸對(duì)乳腺痛細(xì)

5、胞遷移和侵襲能力的影響。
　　3.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將質(zhì)粒CCR7-shRNA(17428，17432)及其相應(yīng)的空白質(zhì)粒NC-shRNA轉(zhuǎn)染MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞，沉默乳腺痛細(xì)胞的CCR7基因;CCL21分別刺激各轉(zhuǎn)染細(xì)胞，Western blot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞CCR7和EMT標(biāo)志物的表達(dá)情況;分別采用創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCL21/CCR7軸對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。
　　

6、4.運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件包SPSS17.0對(duì)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化染色顯示，乳腺癌患者的原位癌組織中CCR7、N-cadherin、Slug呈高表達(dá)，表達(dá)率分別為60％(36/60)、76.67％(46/60)、65％(40/60)，而且表達(dá)強(qiáng)度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否和臨床病理分期有密切關(guān)系。另外，CCR7表達(dá)與N-cadherin、Slug表達(dá)呈正相關(guān)。
　　2.CCL21刺激細(xì)胞株后，細(xì)

7、胞的E-cadherin蛋白和mRNA表達(dá)水平下降，而CCR7、N-cadherin、Slug、Vimentin蛋白和mRNA表達(dá)水平上升;同時(shí)，乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲數(shù)目均增加。
　　3.沉默乳腺癌細(xì)胞株的CCR7基因，再用CCL21刺激癌細(xì)胞，與對(duì)照組比較，細(xì)胞對(duì)E-cadherin、N-cadherin、Slug、Vimentin的表達(dá)沒有發(fā)生變化，即CCL21誘導(dǎo)的EMT受到抑制;癌細(xì)胞向CCL21區(qū)的遷移和侵襲數(shù)目明顯減

8、少。
　　結(jié)論:CCR7、N-cadherin和Slug在乳腺癌組織高表達(dá)，并與淋巴轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系;CCL21/CCR7軸能夠誘發(fā)乳腺癌細(xì)胞EMT，并由此促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞侵襲與向配體區(qū)域的定向遷移。
　　意義:本文在國(guó)內(nèi)、外首次研究CCL21/CCR7對(duì)乳腺癌細(xì)胞EMT的誘導(dǎo)作用，探尋其促進(jìn)癌細(xì)胞定向遷移的分子機(jī)制。研究成果將對(duì)于闡明CCL21/CCR7促進(jìn)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制、尋找其關(guān)鍵分子以選擇有效的靶向治療于段等奠定基