長鏈非編碼RNAMEG3對急性髓細胞白血病生長的影響及其分子機制.pdf

1、目的:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是最常見的血液腫瘤，預(yù)后差，長期存活率僅5-16％。目前，研究發(fā)現(xiàn)AML的發(fā)病與許多因素有關(guān)，如復(fù)發(fā)性的體細胞突變及基因表達與表觀遺傳學的改變，然而AML發(fā)病的分子機制尚不清楚，因此迫切的需要對AML的分子機制進行深入研究。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一種長度大于200bp，沒有編碼功能的RNA，能夠調(diào)控染色質(zhì)重構(gòu)、組蛋白修飾和DNA甲基化等，深刻影響著腫

2、瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展。長鏈非編碼RNA MEG3是新近發(fā)現(xiàn)的一種具有抑癌功能的長鏈非編碼RNA，在多種腫瘤的的形成和進展中發(fā)揮著非常重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)MEG3在急性髓細胞白血病(AML)中的表達明顯下降，但其對AML腫瘤生物學行為的影響至今還不清楚。本研究旨在應(yīng)用功能獲得（基因過表達）手段闡明MEG3對AML腫瘤生長的影響，希望能進一步揭示AML發(fā)病的分子機制，為AML的診斷提供新的靶標。
　　方法:1、利用RT-qPCR檢測

3、AML細胞系中MEG3的表達水平。2、構(gòu)建MEG3慢病毒過表達載體。3、建立穩(wěn)定過表達MEG3的U937細胞株，RT-qPCR檢測MEG3的表達。4、MTT檢測MEG3對AML細胞增殖的影響。5.流式細胞術(shù)檢測MEG3對AML細胞凋亡及周期的影響。6、在穩(wěn)定表達MEG3的U937細胞株中用RT-qPCR和Western Blot檢測MEG3下游靶標MDM2、Rb、DNMT3A的變化。
　　結(jié)果:1、RT-qPCR檢測AML細胞系，

4、發(fā)現(xiàn)AML細胞系普遍低表達或不表達MEG3。2、成功構(gòu)建MEG3慢病毒過表達載體，并篩選出穩(wěn)定表達MEG3的U937細胞株。3、利用MEG3過表達載體處理AML細胞48h后，用MTT檢測細胞增殖，發(fā)現(xiàn)過表達MEG3組細胞增殖能力較對照組明顯下降。4、利用MEG3過表達載體處理AML細胞48h后，用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡及周期，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，處理組細胞凋亡增加，細胞停滯在G0/G1期，且S期明顯降低。5、利用穩(wěn)定表達MEG3的U937