葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥基因突變及甲基化分析.pdf

1、目的：
　　通過對(duì)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）基因全編碼序列及啟動(dòng)子區(qū)突變掃描和啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析，進(jìn)一步了解 G6PD基因突變的特點(diǎn),同時(shí)探討啟動(dòng)子區(qū)甲基化是否對(duì)G6PD基因表達(dá)產(chǎn)生影響，以此提高G6PD缺乏癥的分子診斷水平。
　　方法:
　　本研究采用RT-PCR結(jié)合基因測序，檢測全血樣本G6PD基因全編碼區(qū)突變情況；運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量

2、PCR方法測定樣本mRNA表達(dá)水平；使用 DNA-PCR聯(lián)合測序方法檢測啟動(dòng)子區(qū)突變情況、女性雜合或純合突變類型及鑒定新突變類型；應(yīng)用重亞硫酸氫鹽處理后測序(BSP)和甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析方法(MS-HRM)檢測G6PD基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化情況。
　　結(jié)果：
　　測定樣本G6PD/6PGD比值，根據(jù)比值將受檢對(duì)象分為2組，即G6PD缺乏組（比值＜1.00）和對(duì)照組（比值≥1.00）。195個(gè)樣本中，G6PD缺乏組

3、130例，對(duì)照組65例,其中男性145例，女性50例；共檢出18種編碼區(qū)突變類型，以G1376T、G1388A、A95G最常見，含1種國內(nèi)外尚未報(bào)道的錯(cuò)義突變（ A1088T）及1種新發(fā)現(xiàn)的同義突變（C1191T）。對(duì)于G6PD缺乏組，RT-PCR結(jié)合測序法與G6PD/6PGD比值法檢出率一致，測序提示所有樣本均為編碼區(qū)突變。對(duì)于對(duì)照組，比值法漏檢的28例樣本經(jīng)RT-PCR聯(lián)合測序證實(shí)為錯(cuò)義或同義突變，均為女性樣本。DNA-PCR聯(lián)合測

4、序證實(shí)所有女性突變樣本中僅2例為純合型，其余均為雜合型。將22例mRNA表達(dá)水平降低者（Ct值≤0.5）納入啟動(dòng)子區(qū)突變掃描和甲基化分析。啟動(dòng)子區(qū)未發(fā)現(xiàn)基因突變；甲基化分析顯示92％的女性樣本(46/50)存在甲基化現(xiàn)象，也有少數(shù)樣本未檢測出甲基化，男性均未發(fā)現(xiàn)甲基化現(xiàn)象。
　　結(jié)論：
　　G6PD缺乏癥主要以編碼區(qū)單個(gè)堿基點(diǎn)突變?yōu)橹?，發(fā)現(xiàn)2種新的突變類型。G6PD/6PGD比值法對(duì)男性 G6PD缺乏癥患者檢出率高（100%