染料木素衍生物體外抗氧化活性篩選.pdf

1、目的：從九種染料木素衍生物中篩選出抗氧化活性優(yōu)于母體的衍生物，為構(gòu)效關(guān)系研究和異黃酮類藥物研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.采用Fenton反應(yīng)-鄰二氮菲-Fe2+光度法，以H2O2為底物產(chǎn)生·OH，測定染料木素衍生物清除·OH能力；2.采用FRAP法，在酸性條件下，F(xiàn)e3+-TPTZ可被樣品中還原性物質(zhì)還原為Fe2+-TPTZ形式,并呈現(xiàn)出明顯的藍色,于593nm處具有最大光吸收，用以反映樣品總還原能力；3.硫氰酸鐵法（FTC）

2、，亞油酸自動氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，用定量的方法考察抗氧化劑的抗脂質(zhì)過氧化物能力；4.在體外用 H2O2（100~900nM）處理人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC），并采用CCK-8法檢測細胞活力，構(gòu)建H2O2誘導(dǎo)的HUVEC氧化應(yīng)激損傷模型；5.采用CCK-8法檢測染料木素以及初步篩選出來的4號、9號衍生物對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)HUVEC損傷的保護作用；6.觀察染料木素以及初步篩選出來的4號、9號衍生物對內(nèi)皮細胞數(shù)目及形態(tài)的影響；7.將通過初步篩

3、選出來的4號、9號衍生物以不同濃度(20nM，100nM，500nM)預(yù)處理HUVEC，以MDA、LDH、GSH、SOD、CAT酶活力為指標(biāo)，分別觀察其對HUVEC氧化應(yīng)激損傷的保護作用。
　　結(jié)果：1.染料木素衍生物均可清除體系中的·OH，2-9號樣品在0~80μM時隨濃度的增加其清除能力增強，在80μM濃度下，·OH清除率為VC﹥9號﹥?nèi)玖夏舅丞?號﹥7號﹥6號﹥4號，其他未見明顯差異；2.染料木素衍生物均有還原能力，在0~4

4、00μM時其還原能力隨濃度的上升而增強，9號 FRAP值顯著大于染料木素（p﹤0.05)，其它與染料木素比較未見明顯差異；3.染料木素衍生物均有抗脂質(zhì)過氧化物能力，當(dāng)測定樣品濃度為400μM，體系反應(yīng)4天，測定結(jié)果得到4、9號抗脂質(zhì)過氧化物明顯強于母體，其中4號顯著高于染料木素（p﹤0.05)；4.在體外構(gòu)建了750μM H2O2誘導(dǎo)的HUVEC氧化應(yīng)激損傷模型；5.在20nM~500nM濃度范圍內(nèi)，可見染料木素、4號和9號保護作用呈濃

5、度依賴關(guān)系,因此其對H2O2誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞活力的下降有顯著的抑制作用，而9號呈現(xiàn)較母體更強的抑制作用；6.樣品各劑量組細胞的形態(tài)比較損傷組均得到不同程度的改善,大部分細胞呈多角形或短梭形,細胞間隙變小，表明染料木素、4號、9號對HUVEC形態(tài)具有良好的保護作用；7.染料木素、4號、9號(20~500nM)可濃度依賴的上調(diào)SOD、CAT、GSH的水平，并抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的SOD、CAT、GSH水平的降低,其中9號上調(diào) SOD、CAT、GSH