轉基因玉米質粒標準分子的構建與應用.pdf

1、隨著轉基因生物的迅速發(fā)展，其安全性在全球范圍內引起激烈的爭論與普遍關注。世界各國正在努力制定相應的法律和法規(guī)，加強對進出口轉基因植物及其產品的管理。為保障我國轉基因產品標識管理制度的順利實施，本文主要從兩個方面開展了轉基因產品檢測技術研究： 第一，適合轉基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863定性、定量PCR檢測的陽性標準分子的研制。我國發(fā)布實施的行業(yè)標準和國家標準中均以已知轉基因產品作為陽性對照。隨著轉基因檢測

2、工作越來越廣泛，對于陽性對照的需求量也越來越大。標準物質在轉基因產品定性及定量分析中非常重要，是檢測的標尺。針對目前使用的基因DNA保存期短，經常提取需花費一定的時間和試劑的缺點，本文以轉基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863為研究對象，研制了適合定性、定量PCR檢測的陽性標準分子。此標準分子分別將玉米各自的轉化體特異性序列和內標準基因（zSSⅡb）片段通過兩種方式，分別插入質粒pMD18—T的不同多克隆位點上，并通過

3、雙酶切方法驗證兩個片段都被克隆到受體載體pMD18—T中。通過PCR對其適用性進行了驗證，結果表明質粒陽性標準分子的檢測結果與作者保存的基因組DNA測試樣品中含有的轉基因成分一致。這表明PCR結果是可靠的，獲得的重組克隆質粒作為轉基因產品檢測時的陽性對照是可行的，且標準分子以環(huán)形DNA狀態(tài)存在，具有提取簡便、易于保存、用量少等優(yōu)點。 第二，以轉基因玉米陽性標準分子制作標準曲線，測定轉基因植物濃度。本文在實驗室已獲得的轉基因玉米標