轉(zhuǎn)基因玉米質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的構(gòu)建與應(yīng)用.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因生物的迅速發(fā)展，其安全性在全球范圍內(nèi)引起激烈的爭(zhēng)論與普遍關(guān)注。世界各國(guó)正在努力制定相應(yīng)的法律和法規(guī)，加強(qiáng)對(duì)進(jìn)出口轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品的管理。為保障我國(guó)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識(shí)管理制度的順利實(shí)施，本文主要從兩個(gè)方面開(kāi)展了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)研究： 第一，適合轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863定性、定量PCR檢測(cè)的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分子的研制。我國(guó)發(fā)布實(shí)施的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中均以已知轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品作為陽(yáng)性對(duì)照。隨著轉(zhuǎn)基因檢測(cè)

2、工作越來(lái)越廣泛，對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照的需求量也越來(lái)越大。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品定性及定量分析中非常重要，是檢測(cè)的標(biāo)尺。針對(duì)目前使用的基因DNA保存期短，經(jīng)常提取需花費(fèi)一定的時(shí)間和試劑的缺點(diǎn)，本文以轉(zhuǎn)基因玉米Bt11、Bt176、MON810和MON863為研究對(duì)象，研制了適合定性、定量PCR檢測(cè)的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分子。此標(biāo)準(zhǔn)分子分別將玉米各自的轉(zhuǎn)化體特異性序列和內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因（zSSⅡb）片段通過(guò)兩種方式，分別插入質(zhì)粒pMD18—T的不同多克隆位點(diǎn)上，并通過(guò)

3、雙酶切方法驗(yàn)證兩個(gè)片段都被克隆到受體載體pMD18—T中。通過(guò)PCR對(duì)其適用性進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明質(zhì)粒陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分子的檢測(cè)結(jié)果與作者保存的基因組DNA測(cè)試樣品中含有的轉(zhuǎn)基因成分一致。這表明PCR結(jié)果是可靠的，獲得的重組克隆質(zhì)粒作為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)時(shí)的陽(yáng)性對(duì)照是可行的，且標(biāo)準(zhǔn)分子以環(huán)形DNA狀態(tài)存在，具有提取簡(jiǎn)便、易于保存、用量少等優(yōu)點(diǎn)。 第二，以轉(zhuǎn)基因玉米陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分子制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定轉(zhuǎn)基因植物濃度。本文在實(shí)驗(yàn)室已獲得的轉(zhuǎn)基因玉米標(biāo)