那格列奈對(duì)利伐沙班在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)影響.pdf

1、第一部分 LC-MS/MS測(cè)定大鼠血漿中利伐沙班濃度及那格列奈對(duì)利伐沙班藥動(dòng)學(xué)的影響
　　目的:創(chuàng)建LC-MS/MS法測(cè)定血漿利伐沙班濃度，研究大鼠血漿中利伐沙班濃度及那格列奈對(duì)利伐沙班藥動(dòng)學(xué)的影響，為臨床兩藥聯(lián)合應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:色譜、質(zhì)譜條件:色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);選用API4000+型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式進(jìn)行監(jiān)測(cè);在正離子

2、模式下的電噴霧離子源;選擇監(jiān)測(cè)離子反應(yīng)分別為m/z436.2→145.2（利伐沙班）和m/z370.1→278.0（艾瑞昔布）;流動(dòng)相:10 mmoL/L的醋酸銨(pH=3.14)-乙腈(50∶50，V/V);流速:0.8 ml/min;柱溫:30℃;樣本進(jìn)樣量:20μl;內(nèi)標(biāo):艾瑞昔布。
　　將36只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組18只，實(shí)驗(yàn)組每天灌胃那格列奈混懸液(12 mg/kg)3次，對(duì)照組每天灌胃等體積的空

3、白混懸液3次，連續(xù)3天。第4天早晨在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別灌胃那格列奈和空白混懸液30 min后，每只大鼠灌胃利伐沙班混懸液(2.6mg/kg)，并于灌胃利伐沙班前(0 h)和灌胃利伐沙班后10、20、30、45min、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼內(nèi)眥取血，血漿樣品處理后用LC-MS/MS法測(cè)定，選用DAS2.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)兩組大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　

4、結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù):AUC0-1分別為(2572.67±1017.61)μg·h/L和（1692.75±654.72）μg·h/L; AUC0-∞分別為（2713.29±1101.60）μg·h/L和（1760.25±649.11）μg·h/L;t1/2分別為(4.00±1.48)h和（3.46±1.10）h;Tmax分別為(0.86±0.15)h和(0.69±0.20)h;CL分別為（1.11±0.43）L/(h·kg

5、)和（1.68±0.60）L/(h·kg);V分別為（5.80±1.63）L和（7.95±2.74）L;Cmax分別為（537.83±141.35）μg/L和(438.19122.02)μg/L;結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)組的t1/2與對(duì)照組相比無顯著差異(P＞0.05)，AUC0-t、 AUC0-∞、Cmax、Tmax明顯增加，有顯著性差異(P＜0.05)，CL、V、明顯減小，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)所建立的LC-M

6、S/MS法測(cè)定大鼠血漿中利伐沙班濃度，方法簡(jiǎn)便易行、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于大鼠血漿中利伐沙班濃度的測(cè)定及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究;那格列奈與利伐沙班聯(lián)合用藥后，那格列奈可顯著增加大鼠體內(nèi)利伐沙班的吸收程度，并使利伐沙班的消除速度減慢。
　　第二部分那格列奈對(duì)利伐沙班在大鼠體內(nèi)藥效學(xué)的影響
　　目的:考察那格列奈對(duì)利伐沙班在大鼠體內(nèi)藥效學(xué)的影響
　　方法:將18只SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組6只，分別為利伐沙班組、那格列奈組

7、、利伐沙班+那格列奈組（合并用藥組）。利伐沙班組于每天灌胃利伐沙班混懸液(2.6 mg/kg)1次和與那格列奈組等體積的空白混懸液3次;那格列奈組于每天灌胃那格列奈混懸液(12 mg/kg)3次和與利伐沙班組灌胃等體積的空白混懸液1次;合并用藥組于每天同時(shí)給予同等劑量那格列奈混懸液3次和利伐沙班混懸液1次;利伐沙班組、那格列奈組及合并用藥組均連續(xù)給藥5天。每只大鼠第一次給藥前取空白血，之后分別在每天給藥后45 min大鼠眼內(nèi)眥取血1.5

8、～2ml于3ml真空抗凝管中，3000 r/min離心5 min，使用貝克曼·庫爾特全自動(dòng)凝血分析儀，分別測(cè)定利伐沙班組、那格列奈組和合并用藥組的重要藥效學(xué)參數(shù)凝血酶原時(shí)間（Prothrombin time，PT）和活化部分凝血酶時(shí)間(Activated partialthromboplastin time，APTT)，國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(Internationalnormalizedration，INR)，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。
　

9、　結(jié)果:三組主要藥效學(xué)參數(shù):那格列奈組藥效學(xué)參數(shù)PT、APTT及INR值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);利伐沙班組和合并用藥組藥效學(xué)參數(shù)統(tǒng)計(jì)APTT值無顯著差異(P＞0.05)，但兩組藥物的PT、INR值均比治療前顯著增加(P＜0.05);利伐沙班組與合并用藥組兩組間同時(shí)期測(cè)得的藥效學(xué)參數(shù)PT、APTT、INR值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:利伐沙班與那格列奈聯(lián)合應(yīng)用后，利伐沙班在大鼠體內(nèi)的藥效學(xué)參數(shù)無顯著變化，表明