胺碘桐對(duì)替格瑞洛在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及藥效學(xué)的影響.pdf

1、第一部分胺碘酮對(duì)替格瑞洛在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響
　　目的:研究替格瑞洛在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及胺碘酮對(duì)其代謝的影響。
　　方法:色譜柱:Diamonsil C18色譜柱（150 mm4.6 mm，5μm）;檢測(cè)器:AB SCIEX API4000+檢測(cè)器;柱溫:30℃;流動(dòng)相:乙腈-10mM醋酸銨水溶液（甲酸調(diào)pH3.14）(80∶20，V/V);流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10μL;內(nèi)標(biāo):布洛芬。
　　將大鼠隨機(jī)分

2、為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組8只，實(shí)驗(yàn)組第1天給予胺碘酮負(fù)荷劑量60 mg/kg，第2到6天給予維持劑量20 mg/kg，每日2次;替格瑞洛第1天給予負(fù)荷劑量18 mg/kg，第2到6天給予維持劑量9mg/kg，每日2次。第7天給予維持劑量胺碘酮和替格瑞洛維持劑量一次，并于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)取血，分離血漿，冷凍保存。
　　對(duì)照組第1天灌胃替格瑞洛負(fù)荷劑量18 mg/kg，第2到6天給予替格瑞洛維持劑量9 mg/kg，每日2次，每天灌胃蒸餾

3、水（與實(shí)驗(yàn)組胺碘酮等體積），每天2次，第7天給予維持劑量替格瑞洛一次，并于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)取血，分離血漿，冷凍保存。
　　血漿樣品處理后用LC-MS/MS測(cè)定，采用DAS2.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并用SPSS13.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)兩組大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:方法學(xué)部分:標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.0075X-0.0530(線性范圍:10.0～500.0 ng/mL，r=0.9982)。最低定量限為10.0 ng/

4、mL。低、中、高濃度替格瑞洛的絕對(duì)回收率分別為（93.43±1.14）％、（92.27±2.56）％、(93.61±2.43)％，其RSD值分別為1.2％、2.8％、2.6％。內(nèi)標(biāo)布洛芬的絕對(duì)回收率為(91.38±1.60)％。其RSD值為1.7％。低、中、高濃度替格瑞洛的相對(duì)回收率分別為（101.65±0.09）％、（94.46±1.34）％、（92.77±0.05）％，其RSD值分別為9.0％、1.4％、4.9％。日內(nèi)及日間精密度R

5、SD均小于10％。室溫放置24 h、-40℃保存5天對(duì)測(cè)定無(wú)影響，反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定。
　　對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下:AUC0-36 h分別為(2637.29±1059.26) mg·h·L-1和（3806.35±1604.03）mg·h·L-1; AUC0-∞分別為(2913.53±1319.84)mg·h·L-1和（4478.14±2054.48）mg·h·L-1; t1/2分別為（8.24±5.30）h和（11.2

6、3±5.79）h;Tmax分別為（1.19±0.26）h和（1.31±0.37）h;CL分別為（3.54±1.21）L·h-1·kg-1和（2.45±1.12）L·h-1·kg-1;V分別為(44.02±22.17)L·kg-1和（35.98±18.85）L·kg-1; Cmax分別為（203.13±84.59）mg·L-1和（316.88±95.93）μg·L-1。與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組的Cmax有顯著性差異(P＜0.05)，AUC0-3

7、6 h、AUC(0-∞)、CL、V、t1/2、 Tmax與對(duì)照組相比沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了測(cè)定大鼠血漿中替格瑞洛濃度的LC-MS/MS法，該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可滿足藥動(dòng)學(xué)研究。研究結(jié)果表明，合用胺碘酮后，替格瑞洛有代謝減慢、清除速度降低、藥時(shí)曲線下面積增大的趨勢(shì)。
　　第二部分胺碘酮對(duì)替格瑞洛在大鼠體內(nèi)藥效學(xué)的影響
　　目的:考察大鼠體內(nèi)胺碘酮對(duì)替格瑞洛血小板聚集抑制率的

8、影響。
　　方法:大鼠眼內(nèi)眥取血3mL，3.8％枸櫞酸鈉溶液抗凝（全血∶抗凝劑=4∶1），700 r/min離心10 min，取上清部分即富血小板血漿(PRP)，剩余部分3000 r/min離心3min，取上清部分即貧血小板血漿(PPP)。PRP中血小板計(jì)數(shù)為4.0X10/mm=I左右。按照Bom氏比濁法，將盛有225μLPRP及1小磁珠的比濁管置于血小板聚集儀中，經(jīng)PPP標(biāo)定后，加入誘導(dǎo)劑ADP50μL誘導(dǎo)聚集[8]。所用ADP

9、的終濃度為5μg/mL，測(cè)得聯(lián)合用藥前后5min內(nèi)血小板的最大聚集率，按照血小板聚集抑制率=（未給藥血小板聚集率-給藥后血小板聚集率）/給藥前血小板聚集率×100％，計(jì)算大鼠體內(nèi)血小板聚集抑制率。通過(guò)對(duì)比聯(lián)合用藥替格瑞洛大鼠體內(nèi)血小板聚集率抑制率的變化，得出大鼠體內(nèi)合用胺碘酮對(duì)替格瑞洛藥效學(xué)影響。
　　將健康雄性SD大鼠16只，清潔級(jí)，隨機(jī)分為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，給藥前進(jìn)行眼內(nèi)眥取血。對(duì)照組1～14天單獨(dú)給予替格瑞洛，實(shí)驗(yàn)組1～14天