鹽酸沙格雷酯對鹽酸普羅帕酮在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響.pdf

1、目的：建立鹽酸普羅帕酮在大鼠體內(nèi)血藥濃度的HPLC測定方法，并對兩組分別給予蒸餾水+鹽酸普羅帕酮和鹽酸沙格雷酯+鹽酸普羅帕酮的大鼠進(jìn)行鹽酸普羅帕酮血藥濃度的測定，考察兩藥合用后藥代動力學(xué)的特征，從而確定鹽酸沙格雷酯對鹽酸普羅帕酮在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的影響。
　　方法：
　　1、給藥方法及血漿樣品采集：雄性Wistar大鼠38只，隨機(jī)分為兩組，每組19只。實(shí)驗(yàn)組按10mg/kg給予鹽酸沙格雷酯，每日3次灌胃，連續(xù)5天；對照組給

2、予等量蒸餾水，每日3次灌胃，連續(xù)5天。第6日，給予鹽酸普羅帕酮9mg/kg，于不同的時(shí)間點(diǎn)取血，-40℃保存。
　　2、血漿樣品處理：取血漿200μl，加內(nèi)標(biāo)（6μg/ml伏立康唑的甲醇溶液）20μl，加pH9.0的硼砂緩沖溶液100μl，混勻后，加乙醚800μl，渦旋震蕩1min，10900rpm離心，取上清液，于40oC水浴氮?dú)饬鞔蹈桑?00μl甲醇溶解，取20μl進(jìn)樣。
　　3、色譜條件：Symmetry Shield

3、 RPC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；Waters486紫外檢測器；流動相為甲醇：磷酸二氫鉀-磷酸緩沖溶液：三乙胺（64:36:0.144，V/V）；流速：1ml/min；檢測波長：248nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μl；內(nèi)標(biāo)：伏立康唑。
　　4、低定量限及最低檢測限的確定：用倍比稀釋法確定最低定量限及最低檢測限。
　　5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配制0.125，0.25，0.5，1，2，4，8μg/ml的鹽

4、酸普羅帕酮模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣。以鹽酸普羅帕酮與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（Y）對血漿藥物濃度（X）回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
　　6、回收率：分別制備濃度為0.25，1，6.4μg/ml鹽酸普羅帕酮模擬血漿樣品各5份，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣，鹽酸普羅帕酮峰面積與等量鹽酸普羅帕酮對照品溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值，即得鹽酸普羅帕酮的提取回收率；內(nèi)標(biāo)峰面積與等量內(nèi)標(biāo)溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值，即得內(nèi)標(biāo)提取回收率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

5、計(jì)算的測得濃度與理論濃度的比值，即得方法回收率。
　　7、精密度：分別制備濃度為0.25，1，6.4μg/ml的鹽酸普羅帕酮模擬血漿樣品各5份，分別于一日內(nèi)0，1，2，3，4h處理并測定，計(jì)算日內(nèi)精密度；于0，1，2，3，4日處理并測定，計(jì)算日間精密度。
　　8、穩(wěn)定性：1μg/ml的鹽酸普羅帕酮模擬血漿樣品處理后，分別于0，1，2，3，4h測定，考察處理樣品穩(wěn)定性；1μg/ml的鹽酸普羅帕酮模擬血漿樣品即刻處理并測定或-4

6、0℃低溫避光保存15天后處理并測定，考察低溫保存穩(wěn)定性；1μg/ml的鹽酸普羅帕酮模擬血漿樣品即刻處理或反復(fù)凍融3次后處理，分別測定，考察反復(fù)凍融穩(wěn)定性。
　　9、藥代動力學(xué)分析：大鼠血漿樣品按血漿樣品處理方法處理并測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算血漿藥物濃度，用DAS2.1.1藥代動力學(xué)軟件對大鼠藥-時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，求算藥代動力學(xué)參數(shù)。對兩組參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，看有無顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1、鹽酸普羅帕酮保留時(shí)間為

7、8.1min，伏立康唑保留時(shí)間為11.3min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)不干擾鹽酸普羅帕酮和伏立康唑的測定。
　　2、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=1.1789X+0.0685，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，鹽酸普羅帕酮血漿藥物濃度在0.125～8.0μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限為0.125μg/ml，最低檢測限為0.05μg/ml。
　　3、回收率：低、中、高三種不同濃度的鹽酸普羅帕酮血漿樣品的方法回收率分別為（96.50±6.75）

8、％，（102.33±2.81）%和（106.70±0.78）%， RSD值分別為7.0%，2.8%和0.7%；提取回收率分別（73.71±6.59）%，（82.45±5.86）%和（87.37±2.63）%，RSD值分別為8.9%，7.1%和3.0%；內(nèi)標(biāo)提取回收率為（69.71±1.18）%，RSD值為1.7%。
　　4、精密度：日內(nèi)精密度結(jié)果顯示，低、中、高三種濃度血漿樣品的RSD值分別為7.0%，2.8%和0.7%；日間精密

9、度的RSD值分別為5.9%，1.1%和4.3%。
　　5、穩(wěn)定性：血漿樣品低溫保存15天和反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定，RSD值分別為1.9%和5.7%；處理血漿樣品放置4h對測定無影響，RSD值為7.1%。
　　6、對照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠按既定方案給藥后，藥代動力學(xué)參數(shù)如下：t1/2分別為（2.50±1.41）h，（2.02±0.77）h；AUC(0-t)分別為（4.03±0.74）mg·h/L，（5.40±2.20）mg·h/L；A

10、UC(0-∞)分別為（5.36±1.73）mg·h/L，（6.61±2.81） mg·h/L；CLz分別為（1.85±0.58）L/h/kg，（1.57±0.56）L/h/kg；Cmax分別為（3.31±0.76） mg/L，（3.95±1.78）mg/L；Vz分別為（6.00±2.92）L/kg，（4.31±1.68）L/kg。
　　結(jié)論：
　　1、本實(shí)驗(yàn)建立了大鼠血漿中鹽酸普羅帕酮濃度的HPLC測定方法，該方法能使鹽酸普

11、羅帕酮和內(nèi)標(biāo)有良好的分離，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對測定結(jié)果沒有影響；血漿樣品低溫保存15天或反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定，處理血漿樣品放置4h對測定無影響；該測定方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于大鼠血漿中鹽酸普羅帕酮的含量測定。
　　2、大鼠在給予安慰劑或鹽酸沙格雷酯達(dá)到穩(wěn)態(tài)后再給予鹽酸普羅帕酮藥代動力學(xué)參數(shù)AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax的90%置信區(qū)間均超出，存在顯著性差異。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)論為鹽酸沙格雷酯對鹽酸普羅帕酮在大鼠體內(nèi)