DFP在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、【目的】
　　 去鐵酮(deferiprone,DFP)是一種化學(xué)合成金屬螯合劑，化學(xué)名稱為1，2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮。去鐵酮在臨床常用于治療鐵負(fù)荷過多的地中海貧血患者，是目前唯一可以用于口服的金屬螯合劑，對鐵和鋁有較強(qiáng)的螯合作用。低、中、高三種不同濃度的去鐵酮藥代動力學(xué)、組織分布與血漿蛋白結(jié)合率研究國內(nèi)外均未見報道。本實驗通過建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確的測定大鼠血漿及組織中DFP的高效液相色譜-紫外檢測法，用于DFP在

2、大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)、組織分布與血漿蛋白結(jié)合率研究，為進(jìn)一步臨床藥代學(xué)研究和合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 【方法】
　　 1、DFP在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)實驗
　　 1.1實驗動物處理
　　 取Wistar大鼠15只，隨機(jī)分為3組：低劑量組、中劑量組、高劑量組。實驗前平衡3天，饑餓12h后以灌胃方式分別給DFP。在給藥后不同時間點(diǎn)于頸靜脈竇處取血0.25ml，肝素抗凝，制成血漿，血漿經(jīng)處理后取20μl進(jìn)樣

3、測定。
　　 1.2色譜條件
　　 色譜柱：Diamonsil?鉆石C18（250mm×4.6mm,5μm）色譜柱；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（0.05mol·L-1磷酸氫二鈉、5mmol·L-l庚烷磺酸鈉和2 mmol·L-1EDTA，磷酸調(diào)pH=3.0）=8:92（v/v）；流速：1.0 ml·min-1；檢測波長：278nm；檢測溫度：室溫；進(jìn)樣量：20μl。
　　 2DFP在大鼠體內(nèi)組織分布實驗
　

4、　 2.1實驗動物處理
　　 將20只大鼠隨機(jī)分為4組（空白組；10min組；60min組；360min組），每組5只。饑餓12h后，空白組給1ml生理鹽水，其余各組灌胃給DFP。各組于不同時間點(diǎn)斷頭處死，取其各組織。用生理鹽水將組織樣品沖洗干凈，濾紙吸干，加入生理鹽水制成20％的組織勻漿，離心后，上清液經(jīng)處理后取20μl進(jìn)樣。
　　 2.2色譜條件
　　 色譜柱：Diamonsil?鉆石Cl8（250 min

5、x4.6 mm，5μm）色譜柱；流動相：乙腈.磷酸鹽緩沖液（0.05 mol·L-1磷酸氫二鈉、5mmol·L-1庚烷磺酸鈉和2 mmol·L-1EDTA，磷酸調(diào)pH=3.0）=8:92或10:90（v/v）；流速：1.0 ml·min1l；檢測波長：278nm；檢測溫度：室溫；進(jìn)樣量：20μl。
　　 3DFP的大鼠血漿蛋白結(jié)合率實驗
　　 3.1實驗動物處理
　　 取健康雄性Wistar大鼠10只，處死，取血

6、，肝素抗凝，制成血漿。透析內(nèi)液和透析外液經(jīng)處理后進(jìn)樣20μl。
　　 3.2色譜條件
　　 同“2.2色譜條件”。
　　 3.3透析袋對藥物的吸附實驗
　　 于透析袋內(nèi)加入1ml空白透析液，放入含有10ml DFP溶液的廣口瓶中，蓋緊塞子，37℃生化培養(yǎng)箱中放置4h至其平衡，然后測定透析袋外的藥物濃度，計算透析膜對藥物的吸附率。
　　 3.4平衡時間的考察和血漿蛋白結(jié)合率的測定
　　 于透

7、析袋中加入1 ml空白血漿，置廣口瓶中懸浮于10ml不同濃度的DFP透析液中，放置于37℃的生化培養(yǎng)箱中。于一定時間點(diǎn)，測定透析袋內(nèi)、外的DFP濃度，計算DFP的血漿蛋白結(jié)合率。
　　 4數(shù)據(jù)處理與分析
　　 DAS2.0藥代動力學(xué)智能分析軟件計算藥代動力學(xué)參數(shù)和房室模型；SPSS13.0版統(tǒng)計學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計描述和t檢驗。
　　 【結(jié)果】
　　 1DFP在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)實驗結(jié)果
　　 1.

8、1方法學(xué)研究結(jié)果
　　 取DFP對照品溶液經(jīng)光譜掃描，本實驗選用278nm為檢測波長。DFP在本實驗條件的保留時間為10.8min，在1～120mg·L-1范圍內(nèi)線性良好(r=0.9999)，低、中、高三種濃度絕對回收率均大于98.71％，相對回收率在99.04％～100.6％，日內(nèi)變異RSD均小于0.74％，日間變異RSD均小于1.16％，于4℃存放1周和-20℃存放1個月后RSD均小于1.72％，穩(wěn)定性較好。
　　

9、1.2藥代動力學(xué)結(jié)果
　　 大鼠單次以灌胃方式給DFP后體內(nèi)的藥動學(xué)過程符合二室開放模型。低、中、高三種劑量的平均吸收半衰期為18.90、16.08、12.69min，其一級吸收速率Ka為0.05～0.17 min-1；低、中、高三種劑量的平均分布半衰期t1/2a分別為23.33、22.22、20.88min，其表觀分布容積分別為0.70、0.62、0.41 L·kg-1；低、中、高三種劑量的清除率分別為0.017、0.021、

10、0.016 L·min-1kg-1，平均消除半衰期t1/2β分別為53.32、50.87、46.34min；給低、中、高三種劑量DFP后，0-∞時間內(nèi)藥時曲線下面積分別為2380.1、3519.4、8788.7 mg·L-1.min。統(tǒng)計矩法所得低、中、高三種劑量的平均滯留時間MRT(0-1)分別為109.81、95.28、88.70min，血漿末端清除半衰期t1/2z分別為140.28、93.40、63.27min，達(dá)到最大血藥濃度的

11、時間分別為36.00、48.00、54.00min，最大血藥濃度Cmax分別為21.60、37.13、83.25 mg·L-1，表觀分布容積Vz分別為2.80、2.49、1.41 L·kg-t，清除率CLz分別為0.014、0.018、0.016 L·min-1·kg-1，得到的藥時曲線下面積AUC(0-t)值分別為2276.96、3580.54、8933.31 mg·L-1·min。
　　 2DFP在大鼠體內(nèi)組織分布實驗結(jié)果<

12、br>　　 2.1方法學(xué)研究結(jié)果
　　 DFP在小腸的色譜條件下保留時間為10.8 min，在其他組織的色譜條件下保留時間為7.8min。各組織中的DFP在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.9995)，低、中、高三種濃度絕對回收率均大于86.0％，相對回收率在97.1％～109.6％，日內(nèi)變異RSD均小于3.33％，日間變異RSD均小于4.98％，于4℃存放1周和-20℃存放1個月后RSD均小于5.49％，穩(wěn)定性較好。

13、>　　 2.2組織分布結(jié)果
　　 本實驗給大鼠單次灌胃70mg·kg-1DFP，10min后在包括腦和睪丸的各組織中，均檢測出有DFP分布。給藥10min和60min后，胃中DFP的濃度為244.81mg·kg-1和58.86 mg·kg-l，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于同組小腸中DFP含量（P<0.001）。給藥60min和360 min后在肝臟中DFP的平均含量為359.22 mg·kg-1和56.80 mg·kg-1，顯著高于其他組織(P<

14、0.001)。給藥360min后，腎中DFP的含量為10.13 mg·kg-1，顯著高于除肝臟外其他組織中DFP含量(P<0.005)。
　　 3DFP的大鼠血漿蛋白結(jié)合率實驗結(jié)果
　　 3.1方法學(xué)研究結(jié)果
　　 DFP在透析內(nèi)液的色譜條件下保留時間為10.8 min，在透析外液的色譜條件下保留時間為7.8 min。DFP在透析內(nèi)、外液中一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.9998），低、中、高三種濃度絕對回收

15、率均大于98.71％，相對回收率在99.04～101.27％，日內(nèi)變異RSD均小于0.74％，日間變異RSD均小于1.15％，其于37℃存放8h后RSD均小于1.94％，短期穩(wěn)定性較好，于4℃存放1周和-20℃存放1個月后RSD均小于1.72％，長期穩(wěn)定性較好。
　　 3.2血漿蛋白結(jié)合率結(jié)果
　　 低、中、高三種濃度下，透析袋對DFP的平均吸附率分別為4.53％，3.66％和3.41％。在37℃條件下，DFP經(jīng)2h達(dá)到

16、透析平衡，其血漿蛋白結(jié)合率為4.25‰～5.31％，各濃度組間的血漿蛋白結(jié)合率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 【結(jié)論】
　　 1本實驗建立的測定大鼠血漿、組織勻漿和透析液中DFP含量的高效液相色譜法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于DFP在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究、組織分布和血漿蛋白結(jié)合率的研究。
　　 2灌胃給藥后，DFP在大鼠體內(nèi)吸收快、分布廣、消除快，其藥代動力學(xué)過程符合二室模型特征