那屈肝素鈣原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的:建立那屈肝素鈣溶劑殘留乙醇的測(cè)定方法;建立那屈肝素鈣分子量及其分布測(cè)定方法;建立那屈肝素鈣中游離硫酸根的檢測(cè)方法;建立那屈肝素鈣效價(jià)測(cè)定方法;建立那屈肝素鈣中亞硝酸根的檢測(cè)方法;建立那屈肝素鈣中N-NO含量檢測(cè)方法。
　　方法:
　　1、溶劑殘留乙醇測(cè)定
　　(1)頂空氣相色譜法:選用合適的色譜柱，調(diào)整頂空瓶平衡溫度、平衡時(shí)間和柱流量，確定最終的色譜條件。(2)線性范圍考察。(3)方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的檢

2、測(cè)限、定量限、精密度、重復(fù)性、回收率。(4)樣品乙醇?xì)埩魷y(cè)定。
　　2、分子量及其分布測(cè)定
　　(1)線性關(guān)系考察。(2)方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的精密度、重復(fù)性、溶液穩(wěn)定性。(3)樣品的分子量及其分布測(cè)定。
　　3、游離硫酸根測(cè)定
　　(1)方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的檢測(cè)限、定量限、專屬性、線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性。(2)樣品游離硫酸根測(cè)定。
　　4、效價(jià)測(cè)定
　　(1)線性范圍考察。(2)

3、方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的Ⅹa和Ⅱa精密度、Ⅹa和Ⅱa重復(fù)性、Ⅹa和Ⅱa溶液穩(wěn)定性。(3)樣品的效價(jià)測(cè)定。
　　5、亞硝酸根測(cè)定
　　(1)線性范圍考察。(2)方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的精密度、檢測(cè)限、定量限、回收率。(3)樣品的亞硝酸根測(cè)定。
　　6、N-NO測(cè)定
　　(1)線性范圍考察。(2)方法學(xué)考察:分別考察測(cè)定方法的精密度、回收率、檢測(cè)限、定量限。(3)樣品的N-NO測(cè)定:用選定的方法測(cè)定N-N

4、O。
　　結(jié)果:
　　1、溶劑殘留乙醇測(cè)定
　　確定了乙醇?xì)埩魷y(cè)定的最佳色譜條件:以6％氰丙苯基-94％二甲基聚硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱;起始溫度為40℃，維持4分鐘，以每分鐘5℃的速率升溫至80℃，維持2分鐘;進(jìn)樣口溫度為140℃;FID檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為230℃;頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為30分鐘;分流比為2∶1;柱流量:6.85ml/min;進(jìn)樣量:1.0ml。在上述色譜條件下，在15.6

5、25～1000μg/ml濃度范圍內(nèi)，乙醇峰面積與乙醇濃度呈良好線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=3.3×102C+1.28×103，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。乙醇檢測(cè)限為1ppm。乙醇定量限為4ppm。該方法精密度RSD為3.9％，重復(fù)性RSD為2.0％，平均回收率為101.70％，RSD值為2.8％。三批次樣品乙醇測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　2、分子量及其分布測(cè)定
　　以保留時(shí)間為橫坐標(biāo)，以分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，

6、得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:Log(M)=15.1-1.85T+0.107T2-2.22×10-3T3，相關(guān)系數(shù)R=0.9979。分子量精密度RSD為0.20％，重復(fù)性RSD為0.18％，溶液穩(wěn)定性RSD為0.43％。三批次樣品分子量及其分布測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　3、游離硫酸根測(cè)定
　　SO2-4的定量限為0.05μg/ml。SO2-4的檢測(cè)限為0.025μg/ml;專屬性試驗(yàn)中硫酸根離子與氯離子、硝酸根離子和磷酸根離子之間均能互

7、相分開，分離度均大于1.5;在0.5～8μg/ml濃度范圍內(nèi)，硫酸根離子的峰面積與硫酸根離子的濃度呈良好線性關(guān)系。以SO2-4濃度為橫坐標(biāo)，以SO2-4峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=3.67×10-2C-1.50×10-3，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999;硫酸根離子精密度RSD為1.63％，重復(fù)性RSD為1.46％。三批次樣品硫酸根離子測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　4、效價(jià)測(cè)定
　　以Ⅹa濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，吸

8、光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=-0.862logC-0.466，相關(guān)系數(shù)R2=0.9903;以Ⅱ a濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=-0.849logC-0.779，相關(guān)系數(shù)R2=0.9902。Ⅹa效價(jià)測(cè)定精密度RSD為0.63％，Ⅱa效價(jià)測(cè)定精密度RSD為2.08％。Ⅹa效價(jià)測(cè)定重復(fù)性RSD為0.40％，Ⅱa效價(jià)測(cè)定重復(fù)性RSD為1.56％。Ⅹa效價(jià)測(cè)定溶液穩(wěn)定性RSD為0

9、.48％，Ⅱa效價(jià)測(cè)定溶液穩(wěn)定性RSD為2.42％。三批次樣品效價(jià)測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　5、亞硝酸根測(cè)定
　　在0.004μg/ml～0.056μg/ml濃度范圍內(nèi)，亞硝酸根峰面積與亞硝酸根濃度呈良好線性關(guān)系，以NO-2濃度為橫坐標(biāo)，以NO-2峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=0.468×102C-5.36×10-2，相關(guān)系數(shù)R2=1。亞硝酸根測(cè)定精密度RSD為0.76％，檢測(cè)限為0.0016μg/ml，

10、定量限為0.004μg/ml。平均回收率為99.04％，RSD為0.69％。三批次樣品亞硝酸根測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　6、N-NO測(cè)定
　　NDPA濃度在0.03μg/ml～0.15μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以NDPA濃度(C)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得曲線方程為A=2.16×105C+6.18×103，R2=0.9983(R=0.9991)。N-NO測(cè)定精密度RSD為2.27％。平均回收率為9

11、9.75％，RSD為0.93％。NDPA的定量限為0.03μg/ml（該溶液相當(dāng)于N-NO基團(tuán)濃度約為0.010μg/ml）。NDPA的檢測(cè)限為0.005μg/ml（該溶液相當(dāng)于N-NO基團(tuán)濃度約為0.0017μg/ml）。三批次樣品N-NO測(cè)定結(jié)果均符合規(guī)定。
　　結(jié)論:對(duì)比國(guó)內(nèi)低分子肝素鈣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文首次建立了離子色譜法檢測(cè)那屈肝素鈣中亞硝酸的方法;首次建立了熱能分析儀檢測(cè)那屈肝素鈣中N-NO含量的方法;首次建立了離子色譜法