維生素E干預對錳中毒小鼠學習記憶及神經干細胞的影響.pdf

1、目的:采用神經行為學及免疫組織化學等方法研究錳中毒對小鼠海馬區(qū)神經細胞的影響及維生素E對其干預作用，并探討其發(fā)生機制，為錳中毒的機理及干預治療提供實驗依據。
　　方法:1、動物及分組:選用清潔級成年雄性健康的昆明小鼠75只，體重在18-22 g（廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供）。將選用的75只昆明小鼠按隨機對照方法分為5組，分別是對照組(CG)、維生素E組(VG)、錳中毒組(MG)、錳加維生素E組(MVG)、錳加普羅布考組(MPG)

2、，每組15只。2、制作錳中毒小鼠模型:分別對錳中毒、錳加維生素E組、錳加普羅布考組3組小鼠腹腔注射氯化錳(Mncl2)，劑量為20mg/kg，其余2組小鼠腹腔注射等容積的生理鹽水。每只小鼠注射的量為0.01 ml/g，每天下午注射1次，連續(xù)注射4周。3、藥物灌胃:分別對維生素E組、錳加維生素E組行維生素E藥物灌胃干預，劑量為100 mg/kg，對照組和錳中毒組行等容積的橄欖油灌胃，錳加普羅布考組予以普羅布考藥物灌胃，劑量為500mg/k

3、g，每只小鼠灌胃的量是0.01ml/g，各組小鼠每天下午灌胃1次，連續(xù)給藥4周。各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲食。4、神經行為學檢測:4周后用Morris水迷宮檢測5組小鼠的逃避潛伏期和穿越平臺次數，從而測定各組小鼠的學習記憶能力。5、免疫組織化學染色:用免疫組化的方法分別檢測每組小鼠海馬CA1區(qū)和DG區(qū)caspase-3、細胞色素C的表達和海馬DG區(qū)nestin的表達。計算所得免疫組織化學圖像的陽性細胞數，用統(tǒng)計軟件spss16.0

4、和GraphPad Prism5統(tǒng)計分析各組小鼠Moms水迷宮所得數據和免疫組化結果。
　　結果:1、Morris水迷宮檢測結果:水迷宮檢測實驗有定位航行實驗和空間探索實驗兩部分組成，定位航行實驗中，與CG相比，MG小鼠的逃避潛伏期明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;與MG相比，MVG和MPG小鼠的逃避潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;MVG和MPG小鼠的逃避潛伏期相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);

5、 CG和VG小鼠的逃避潛伏期相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。在空間探索實驗中，與CG相比，MG小鼠的穿越平臺的次數明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而與MG比較，MVG和MPG小鼠穿越平臺次數明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;MVG和MPG小鼠穿越平臺次數相比無明顯差別，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;CG和VG小鼠的穿越平臺次數無明顯差別，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。2、免疫組織化學細胞色素C的表

6、達:與CG相比，MG海馬CA1區(qū)和DG區(qū)細胞色素C的表達明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與MG相比，MVG和MPG小鼠細胞色素C的表達明顯減少，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）;CG和VG之間海馬CA1區(qū)和DG區(qū)細胞色素C表達的比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;同時MVG和MPG間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。3、免疫組織化學caspase-3的表達:與CG相比較，MG海馬CA1區(qū)和DG區(qū)caspase-3陽性細胞數

7、明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;與MG相比，MVG和MPG小鼠caspase-3的表達減少，差異有顯著性(P＜0.05);而CG和VG之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);同時MVG和MPG間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。4、免疫組織化學nestin的表達:與CG相比較，MG海馬齒狀回nestin的陽性細胞數明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NVG與MG相比，其nestin的表達明顯增多;而MG和MPG

8、間nestin的表達無明顯差別(P＞0.05);同時CG和VG間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論:1、維生素E和普羅布考干預均可改善錳中毒小鼠的學習記憶能力;2.錳中毒可促進小鼠腦內細胞色素C的增多，上調caspase-3的表達，從而降低小鼠的學習記憶能力;3、維生素E和普羅布考可減少錳中毒小鼠細胞色素C和caspase-3的表達，減少神經細胞的凋亡;4、錳中毒可減少腦內DG區(qū)神經干細胞，維生素E可增加錳中毒小鼠腦