維生素E干預(yù)對(duì)錳中毒小鼠學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)干細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:采用神經(jīng)行為學(xué)及免疫組織化學(xué)等方法研究錳中毒對(duì)小鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的影響及維生素E對(duì)其干預(yù)作用，并探討其發(fā)生機(jī)制，為錳中毒的機(jī)理及干預(yù)治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:1、動(dòng)物及分組:選用清潔級(jí)成年雄性健康的昆明小鼠75只，體重在18-22 g（廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。將選用的75只昆明小鼠按隨機(jī)對(duì)照方法分為5組，分別是對(duì)照組(CG)、維生素E組(VG)、錳中毒組(MG)、錳加維生素E組(MVG)、錳加普羅布考組(MPG)

2、，每組15只。2、制作錳中毒小鼠模型:分別對(duì)錳中毒、錳加維生素E組、錳加普羅布考組3組小鼠腹腔注射氯化錳(Mncl2)，劑量為20mg/kg，其余2組小鼠腹腔注射等容積的生理鹽水。每只小鼠注射的量為0.01 ml/g，每天下午注射1次，連續(xù)注射4周。3、藥物灌胃:分別對(duì)維生素E組、錳加維生素E組行維生素E藥物灌胃干預(yù)，劑量為100 mg/kg，對(duì)照組和錳中毒組行等容積的橄欖油灌胃，錳加普羅布考組予以普羅布考藥物灌胃，劑量為500mg/k

3、g，每只小鼠灌胃的量是0.01ml/g，各組小鼠每天下午灌胃1次，連續(xù)給藥4周。各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲食。4、神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè):4周后用Morris水迷宮檢測(cè)5組小鼠的逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)，從而測(cè)定各組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。5、免疫組織化學(xué)染色:用免疫組化的方法分別檢測(cè)每組小鼠海馬CA1區(qū)和DG區(qū)caspase-3、細(xì)胞色素C的表達(dá)和海馬DG區(qū)nestin的表達(dá)。計(jì)算所得免疫組織化學(xué)圖像的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，用統(tǒng)計(jì)軟件spss16.0

4、和GraphPad Prism5統(tǒng)計(jì)分析各組小鼠Moms水迷宮所得數(shù)據(jù)和免疫組化結(jié)果。
　　結(jié)果:1、Morris水迷宮檢測(cè)結(jié)果:水迷宮檢測(cè)實(shí)驗(yàn)有定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩部分組成，定位航行實(shí)驗(yàn)中，與CG相比，MG小鼠的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與MG相比，MVG和MPG小鼠的逃避潛伏期明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;MVG和MPG小鼠的逃避潛伏期相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);

5、 CG和VG小鼠的逃避潛伏期相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，與CG相比，MG小鼠的穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而與MG比較，MVG和MPG小鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;MVG和MPG小鼠穿越平臺(tái)次數(shù)相比無(wú)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;CG和VG小鼠的穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)明顯差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2、免疫組織化學(xué)細(xì)胞色素C的表

6、達(dá):與CG相比，MG海馬CA1區(qū)和DG區(qū)細(xì)胞色素C的表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與MG相比，MVG和MPG小鼠細(xì)胞色素C的表達(dá)明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;CG和VG之間海馬CA1區(qū)和DG區(qū)細(xì)胞色素C表達(dá)的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;同時(shí)MVG和MPG間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。3、免疫組織化學(xué)caspase-3的表達(dá):與CG相比較，MG海馬CA1區(qū)和DG區(qū)caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

7、明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與MG相比，MVG和MPG小鼠caspase-3的表達(dá)減少，差異有顯著性(P＜0.05);而CG和VG之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);同時(shí)MVG和MPG間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。4、免疫組織化學(xué)nestin的表達(dá):與CG相比較，MG海馬齒狀回nestin的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);NVG與MG相比，其nestin的表達(dá)明顯增多;而MG和MPG

8、間nestin的表達(dá)無(wú)明顯差別(P＞0.05);同時(shí)CG和VG間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1、維生素E和普羅布考干預(yù)均可改善錳中毒小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;2.錳中毒可促進(jìn)小鼠腦內(nèi)細(xì)胞色素C的增多，上調(diào)caspase-3的表達(dá)，從而降低小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;3、維生素E和普羅布考可減少錳中毒小鼠細(xì)胞色素C和caspase-3的表達(dá)，減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡;4、錳中毒可減少腦內(nèi)DG區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞，維生素E可增加錳中毒小鼠腦