泛素連接酶RNF2-BMI1對食管癌細(xì)胞凋亡遷移能力和細(xì)胞周期的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩49頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:
  觀察食管癌細(xì)胞接受電離輻射后,BMI1和RNF2蛋白表達(dá)的時間劑量效應(yīng)關(guān)系,利用RNA干擾技術(shù)抑制ECA109食管癌細(xì)胞中BMI1和RNF2的基因表達(dá),觀察其對細(xì)胞增殖活性、遷移能力、凋亡和細(xì)胞周期的影響,為提高食管癌細(xì)胞放射敏感性奠定基礎(chǔ)。
  方法:
  1、培養(yǎng)ECA109食管癌細(xì)胞株,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測BMI1和RNF2 mRNA水平表達(dá),流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測BMI1和R

2、NF2蛋白水平表達(dá),MTT法檢測ECA109食管癌細(xì)胞的增殖狀況。
  2、將BMI1和RNF2 siRNA轉(zhuǎn)染ECA109食管癌細(xì)胞,western blotting檢測ECA109-B組和ECA109-R組細(xì)胞中BMI1和RNF2的蛋白表達(dá),F(xiàn)CM檢測6Gy照射后1h、2h、4h、8h、12h、24h,ECA109組、ECA109-N組、ECA109-B組、ECA109-R組細(xì)胞周期分布的變化和凋亡比例,Transwell侵襲

3、小室模型檢測轉(zhuǎn)染ECA109-B組、ECA109-R組細(xì)胞的遷移能力。
  結(jié)果:
  1、ECA109食管癌細(xì)胞增殖活性和遷移能力
  1.1 ECA109食管癌細(xì)胞中BMI1和RNF2在mRNA水平和蛋白表達(dá)水平上均有表達(dá)。與對照組相比,不同劑量照射組食管癌細(xì)胞中,BMI1和RNF2在mRNA水平和蛋白表達(dá)水平均明顯增加(P<0.01),且隨著照射劑量的增加,BMI1和RNF2表達(dá)水平逐漸增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在1

4、、2、4Gy照射后2h BMI1和RNF2 mRNA水平和蛋白表達(dá)水平均達(dá)到峰值,6Gy、8Gy照射后1h達(dá)到峰值,隨著照射后時間的延長,BMI1和RNF2的表達(dá)量逐漸降低。
  1.2 MTT檢測結(jié)果顯示,與未照射組相比,各劑量組ECA109食管癌細(xì)胞的增殖水平在照射后不同時間點(diǎn)均明顯降低(P<0.01),隨著照射后時間的延長,ECA109組和ECA109-N組細(xì)胞增殖活性逐漸增加,但ECA109-B組和ECA109-R組細(xì)胞在

5、4h、8h、12h及24h的增殖活性均明顯低于ECA109組和ECA109-N組(P<0.01)。
  1.3 Western blotting檢測結(jié)果顯示,ECA109-B組、ECA109-R組細(xì)胞中BMI1、RNF2蛋白表達(dá)水平均明顯低于ECA109組和ECA109-N組(P<0.01),而ECA109組與ECA109-N組細(xì)胞相比,未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
  1.4 Transwell侵襲小室模型檢測結(jié)果

6、顯示,照射后3.5h ECA109-B組和ECA109-R組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯低于ECA109組和ECA109-N組,具有顯著性差異(P<0.01),而ECA109組和ECA109-N組穿膜細(xì)胞數(shù)未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。此外,ECA109-B組和ECA109-R組穿膜細(xì)胞數(shù)均低于相應(yīng)未照射組,但差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  2、ECA109食管癌細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的情況
  2.1 FCM檢測結(jié)果顯示:未

7、照射組的ECA109、ECA109-N、ECA109-B和ECA109-R細(xì)胞中處于G0/G1期、G2/M期和S期的比例均未見明顯變化(P>0.05),6Gy放射線照射后處于G0/G1期細(xì)胞的比例均明顯低于相應(yīng)未照射組(P<0.01),且照射后ECA109-B組和ECA109-R組處于G0/G1期的比例均明顯高于照射后的ECA109組和ECA109-N組(P<0.05),6Gy放射線照射后各實(shí)驗(yàn)組處于G2/M期的比例明顯高于相應(yīng)未照射組

8、(P<0.01),且ECA109-B組和ECA109-R組處于G2/M期的比例均明顯低于照射后的ECA109組和ECA109-N組(P<0.05)。照射前、后各組處于S期的比例均未見顯著性差異(P>0.05)。
  2.26Gy放射線照射后各組ECA109細(xì)胞凋亡率均明顯高于相應(yīng)未照射組(P<0.05),照射前,ECA109-B組和ECA109-R細(xì)胞凋亡率較ECA109組和ECA109-N組高,但差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論