胃癌組織中ERCC1基因的高甲基化及DNMT1的表達.pdf

1、目的:
　　通過對胃癌及癌旁組織基因表達情況的檢測，分析ERCC1（人切除修復交叉互補基因1）基因啟動子區(qū)甲基化的狀況及DNMT1（DNA甲基轉移酶1）基因的表達在胃癌演變過程中的作用。在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中，胃癌是主要的致死疾病之一，大部分患者診斷時已經為晚期，所以胃癌的早期診斷尤為重要。胃癌產生與演變是一個復雜的病變過程，它受到多因素的共同調控，其中癌基因的非正常激活與抑癌基因轉錄功能的失活是兩個極其重要的原因，表觀遺傳學層面上

2、的改變在病變過程中發(fā)揮著重要的功能，最普遍的表觀遺傳學改變就是DNA甲基化。
　　方法:
　　(1)青島市市立醫(yī)院2014年1月至2014年10月經普外科切除的新鮮腫瘤標本共60例，經病理組織學診斷為為原發(fā)性胃癌，術前未行抗腫瘤治療，比如放療化療，擁有完整的臨床資料。癌組織取自癌病變區(qū)域的中心，并取距離癌組織至少5cm區(qū)域組織作為癌旁組織。分離收集到的標本組織中的DNA，然后使用亞硫酸鈉修飾方法對所得的DNA進行裝飾，采用聚

3、合酶增鏈式反應技術對上述DNA進行擴大增殖。使用MSP方法對胃癌組織及癌旁組織ERCC1基因甲基化情況進行測驗，并檢驗ERCC1和DNMT1表達水平。分析探討在腫瘤演變過程中兩個基因的所發(fā)揮的功效。
　　(2)對收集到的60例標本組織中的RNA進行分離，然后進行逆轉錄反應，形成單鏈DNA，接著應用PCR技術擴大增殖，用熒光定量逆轉錄多聚合酶鏈RT-PCR技術對基因ERCC1、DNMT1的mRNA表達水平進行檢驗。
　　(3)

4、用免疫組織化學方法檢測癌組織和癌旁組織中的ERCC1及DNMT1蛋白表達水平狀態(tài)，探究它們在胃癌演變過程中所發(fā)揮的功效。使用SPSS17.0軟件對試驗得到的數據進行解析，使用x2檢驗方法于計數資料之間的比較中，組間的比較t檢驗進行處理;以P＜0.05作為評判標準，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　(1)應用MSP反應檢測出胃癌組織ERCC1啟動子區(qū)甲基化率為68.3％明顯高于正常組織23.3％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.

5、001)。
　　(2)應用RT-PCR反應方法進行檢測，在ERCC1表達下調的胃癌組織中DNMT1的表達高于ERCC1表達正常的組織，表達水平差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(3)應用免疫組織化學方法檢驗，ERCC1在癌旁組織中的表達陽性率為93.3％，明顯高于胃癌組織56.7％，差異有統(tǒng)計學意義(x2=21.21，P＜0.001)。DNMT1在胃癌組織中的表達陽性率為71.7％，明顯高于癌旁組織16.7％，差異有統(tǒng)

6、計學意義(P＜0.001)。
　　(4)胃癌組織中ERCC1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與ERCC1 mRNA表達之間的關系，在41例ERCC1 mRNA陰性表達的胃癌組織中，檢測出38例該基因啟動子區(qū)甲基化，而在ERCC1 mRNA表達陽性的19例胃癌組織中，僅檢測出3例基因啟動子甲基化，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。
　　(5)胃癌組織中ERCC1與DNMT1蛋白表達之間的相關性分析，胃癌組織中的ERCC1與DNMT1蛋

7、白的表達呈負相關(P＜0.001).
　　結論:
　　(1)在胃癌組織中，可發(fā)現(xiàn)ERCC1基因啟動子區(qū)域發(fā)生高甲基化改變，并且同時伴有該基因蛋白的表達減低，和胃癌的發(fā)生存在一定的關系。
　　(2)胃癌組織中ERCC1基因的mRNA表達低于癌旁組織，mRNA的低表達與ERCC1基因啟動子區(qū)CpG島高甲基化有關。
　　(3)胃癌組織中的ERCC1與DNMT1蛋白的表達呈負相關，胃癌組織中的DNMT1的mRNA及蛋白表