EBV相關(guān)胃癌組織中CTHRC1基因甲基化及表達(dá)的研究.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barrvires,EBV)屬皰疹病毒屬γ皰疹病毒亞科成員,與人類多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)。DNA甲基化是目前最為前沿以及最受關(guān)注的表觀遺傳學(xué)機(jī)制,抑癌基因啟動子區(qū)高度甲基化被認(rèn)為是導(dǎo)致其功能失活進(jìn)而腫瘤發(fā)生的重要原因。CTHRC1基因在血管重塑過程中可抑制TGF信號通路,減少膠原沉積并促進(jìn)細(xì)胞遷移,目前已在人類多種實體腫瘤組織中檢測到CTHRC1基因的異常表達(dá)。
　　 目的:檢測EBV陽性細(xì)胞系和EBV相關(guān)

2、胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)組織中CTHRC1基因的甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達(dá),并與EBV陰性細(xì)胞系和EBV陰性胃癌(EBV-negativedgastriccarcinoma,EBVnGC)組織中CTHRC1基因的甲基化狀態(tài)及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況進(jìn)行比較分析,探討EBV感染對CTHRC1基因甲基化及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)影響。
　　 方法:選取EBV陽性和陰性胃癌細(xì)胞系以及EBVaGC和EBVn

3、GC患者作為研究對象,采用甲基化特異性PCR(Methylation-SpecificPCR,MSP)及亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisulfitegenomicsequencing,BGS)檢測細(xì)胞和組織中CTHRC1基因啟動子區(qū)域CpG島甲基化情況。同時采用實時熒光定量PCR(Real-timequantitativePCR,real-timeqPCR)檢測EBV陽性和陰性胃癌細(xì)胞系以及EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRCl基因

4、的表達(dá)。
　　 結(jié)果:①MsP檢測結(jié)果顯示,4種EBV陽性胃癌細(xì)胞系PT、GT38、GT39和SNU719,以及4種EBV陰性細(xì)胞系SGC7901、HGC.27、BGC.823和MKN-45均表現(xiàn)為M+U型;EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRC1基因的甲基化率分別為95.4%和38.1%,統(tǒng)計學(xué)分析表明,EBVaGC組織中CTHRC1基因的甲基化率明顯高于EBVnGC(x2=16.099,P＜0.05)。②BGs檢測CTH

5、RCl基因啟動子19個CpG位點的甲基化程度發(fā)現(xiàn),除個別位點未發(fā)生甲基化外,4種EBV陽性胃癌細(xì)胞系和4種EBV陰性細(xì)胞系CTHRC1基因啟動子大部分位點均發(fā)生甲基化,兩者間無顯著性差異;部分EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRC1基因的甲基化程度無顯著性差異。③胃癌組織中CTHRC1基因甲基化率在患者不同性別、發(fā)病部位、病理分型以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間均無顯著性差異(P值均＞0.05),而在不同年齡組中CTHRC1基因甲基化率有顯著性

6、差異(x2=8.972,P=0.03)。④qPCR檢測結(jié)果顯示,EBVaGC和EBVnGC組織中CTHRC1基因表達(dá)的Act值分別為10.30±4.24和5.36±3.60,兩組數(shù)據(jù)經(jīng)2-△Ct轉(zhuǎn)換后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,EBVnGC組織中CTHRC1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)明顯高于EBVnGC,差異有顯著性(t=-2.38,P=0.022)。⑤胃癌組織中CTHRC1基因的表達(dá)在性別、年齡及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中無顯著性差異(P值均＞0.05)。
　　

7、 結(jié)論:①EBVaGC組織中CTHRC1基因的甲基化率明顯高于EBVnGC組織,表明EBV感染可能是導(dǎo)致CTHRC1基因調(diào)控區(qū)域甲基化的重要原因,可能為EBV參與EBVaGC發(fā)生的一種機(jī)制。②EBVaGC組織中CTHRC1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)明顯低于EBVnGC組織中CTHRC1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),提示EBV感染可能通過誘導(dǎo)EBVaGC組織中CTHRC1基因的甲基化下調(diào)其轉(zhuǎn)錄表達(dá),從而可能參與EBVaGC的發(fā)生。③EBVaGC組織中CTHRC1