CIK細(xì)胞聯(lián)合?？颂婺釋?duì)肺腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒效應(yīng)研究.pdf

1、背景
　　據(jù)統(tǒng)計(jì),肺癌在我國(guó)惡性腫瘤的死因中占首位,嚴(yán)重影響著國(guó)人的生命健康。其中,非小細(xì)胞肺癌據(jù)是肺癌中最為常見(jiàn)的類(lèi)型,約占其80％～85%。由于缺乏早期有效的檢查手段和篩選,致使我國(guó)80%的肺癌病人在發(fā)現(xiàn)和確診時(shí)已屬晚期,錯(cuò)失了最佳的治療時(shí)間和治療手段。手術(shù)是癌癥患者的首選;對(duì)已不具備手術(shù)指征的患者而言,放、化療亦是非常重要的治療方法。但近年來(lái),由于手術(shù)的不徹底性,化療的多重耐藥和放療的低敏感性,使得臨床治療效果均不佳。在人們

2、的積極探索下,腫瘤生物治療應(yīng)運(yùn)而生,成為腫瘤綜合療法的第四種治療模式。其中,細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-inducedkiller,CIK)是腫瘤過(guò)繼免疫療法的主要效應(yīng)細(xì)胞,成為研究的熱點(diǎn)。CIK細(xì)胞通過(guò)調(diào)動(dòng)及增強(qiáng)患者的免疫功能,從而達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞并防止其轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的目的,改善了腫瘤患者的預(yù)后,使患者的生存質(zhì)量得到很大程度的提高。另外,近年來(lái)針對(duì)細(xì)胞受體和調(diào)控分子、關(guān)鍵基因?yàn)榘悬c(diǎn)的靶向治療也得到了很好的研究和發(fā)展。在肺癌中

3、,人們研究最多的是EGFR(表皮生長(zhǎng)因子受體)基因,由此針對(duì)該基因研究產(chǎn)生的EGFR-TKI(表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑),如厄洛替尼、吉非替尼等,在臨床上取得了相當(dāng)好的成效?，F(xiàn)階段,腫瘤的治療強(qiáng)調(diào)一個(gè)有效的綜合治療模式。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)CIK細(xì)胞和國(guó)產(chǎn)的EGFR-TKI(Icotinib)聯(lián)合作用,在體外對(duì)肺腺癌細(xì)胞系的殺傷實(shí)驗(yàn),研究?jī)煞N方法的可行性及有效率,為臨床上肺癌的綜合治療提供指導(dǎo)意義。
　　目的
　　研究并觀(guān)察C

4、IK細(xì)胞療法和不同濃度下的鹽酸?？颂婺?Icotinib)對(duì)肺腺癌細(xì)胞系:PC9細(xì)胞(表皮生長(zhǎng)因子受體突變型的細(xì)胞)和A549細(xì)胞(表皮生長(zhǎng)因子受體野生型的細(xì)胞)的體外細(xì)胞毒效應(yīng)。
　　方法
　　以體外培養(yǎng)的PC9細(xì)胞及A549細(xì)胞分別為靶細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)分為四組:CIK細(xì)胞單獨(dú)組、3種不同濃度的鹽酸?？颂婺釂嗡幗M、CIK細(xì)胞+不同濃度下的埃克替尼聯(lián)合組和空白對(duì)照組(即單獨(dú)的靶細(xì)胞組)。
　　(1)CCK8試劑盒檢測(cè)CIK

5、細(xì)胞和埃克替尼分別及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)PC9細(xì)胞和A549細(xì)胞的體外生長(zhǎng)抑制作用;
　　(2)AnnexinV-FITC試劑盒利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CIK細(xì)胞和?？颂婺釋?duì)兩種靶細(xì)胞凋亡作用的影響;
　　(3)用MTT法檢測(cè)鹽酸埃克替尼分別對(duì)兩種靶細(xì)胞的IC50值。
　　結(jié)果：
　　1CIK細(xì)胞對(duì)兩種靶細(xì)胞殺傷作用的比較CCK8法及流式檢測(cè)法對(duì)PC9細(xì)胞及A549細(xì)胞的殺傷率及凋亡率相當(dāng),CIK對(duì)兩種靶細(xì)胞之間的細(xì)胞毒效應(yīng)無(wú)顯

6、著差別(P>0.05),說(shuō)明CIK細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞的殺傷具有有效性。
　　2CIK細(xì)胞聯(lián)合Icotinib組與各單獨(dú)組的比較CCK8殺傷和AnnexinV-FITC凋亡實(shí)驗(yàn)可觀(guān)察:CIK細(xì)胞+?？颂婺崧?lián)合組對(duì)靶細(xì)胞的體外殺傷作用均明顯高于各單獨(dú)治療組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01))。
　　3PC9細(xì)胞和A549細(xì)胞之間的比較從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析:聯(lián)合組和?？颂婺釂为?dú)組對(duì)PC9細(xì)胞的殺傷率及凋亡率均高于A549組,聯(lián)合組對(duì)PC

7、9細(xì)胞的殺傷率可達(dá)65.85±1.44%,A549細(xì)胞的聯(lián)合殺傷率達(dá)52.92±1.57%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05));
　　4兩種細(xì)胞的IC50值比較鹽酸埃克替尼對(duì)PC9及A549細(xì)胞作用48h后的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為:0.21±0.03μmol/L、4.79±0.74μmol/L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明EGFR-TKI的靶向藥物對(duì)EGFR基因突變的腫瘤細(xì)胞效果更優(yōu)。
　　結(jié)論