順鉑對替尼泊甙殺傷小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文順鉑對替尼泊甙殺傷小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的影響姓名：翟麗東申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：閻蘊(yùn)力20050301中文摘要乙醇洗滌后真空晾千。加入20川TE溶解DNA1.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色(0.5mgml)紫外光下觀察照相采用RTPCR法檢測TopoIIa和TopoIIB及Spl的表達(dá)與藥物作用之關(guān)系:用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，采用隨機(jī)引物、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，擴(kuò)增產(chǎn)物在1.

2、8%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳(75V50分鐘)，EB染色，應(yīng)用讀膠儀讀取各條帶產(chǎn)物的光密度值并照相。結(jié)果:MTT法測定CDDP的血漿峰濃度與VM26各濃度合用，兩藥有明顯的協(xié)同效應(yīng)。AOEB雙熒光染色觀察細(xì)胞活率結(jié)果:活細(xì)胞被AO染成綠色，中晚期凋亡細(xì)胞或死細(xì)胞被EB染成橘紅色或紅色。分別計(jì)算各組細(xì)胞活率，結(jié)果表明，CDDP與VM26合用與藥物單獨(dú)相比，細(xì)胞活率明顯降低。Hoechst33258熒光染色觀察細(xì)胞凋亡率結(jié)果:活細(xì)胞核界限清晰，

3、圓形或橢圓形，飽滿，呈均勻藍(lán)綠色熒光，染色質(zhì)分布均勻。凋亡細(xì)胞核呈顆粒團(tuán)狀分布，核縮小、碎裂形成多個(gè)碎片。分別計(jì)算各組細(xì)胞凋亡率，結(jié)果表明，CDDP與VM26合用與藥物單獨(dú)相比，細(xì)胞凋亡率明顯增加。DNA斷裂條帶瓊脂糖凝膠電泳顯示:各用藥組均可引起DNA斷裂，兩藥合用與兩藥單用相比DNA損傷程度增加。RTPCR檢測TopoIIa和TopoIIB及Spl的表達(dá):H446細(xì)胞經(jīng)VM26單獨(dú)作用24小時(shí)后，TopoIIa和TopoIIBmRN