甲氧基黃酮類化合物對囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子的激活作用.pdf

1、囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，CFTR)是一種受cAMP依賴的Cl-通道蛋白，在與分泌和吸收相關(guān)組織的上皮細(xì)胞中均表達(dá)，CFTR氯離子通道在這些部位參與液體的分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，CFTR功能障礙可能導(dǎo)致CFTR相關(guān)疾病的發(fā)生，CFTR激活劑在治療CFTR相關(guān)疾病中發(fā)揮重要的作用，因此尋找CFTR激活劑是目前研究的熱點(diǎn)。
　　甲氧基黃

2、酮類化合物是黃酮類化合物家族中重要的一員，其具有多種藥理學(xué)活性，例如抗腫瘤、抗炎、抗氧化、保護(hù)心血管，抗動脈粥樣硬化等，本研究發(fā)現(xiàn)了其激活CFTR Cl-通道的新活性。在前期的工作中，本課題組利用高通量篩選技術(shù)篩選出CFTR激活劑5-羥基-6，7，3'，4'-四甲氧基黃酮(HTF)、3'，4'，5，5'，6，7-六甲氧基黃酮(HXF)和3，5，6，7，8，3'，4'-七甲氧基黃酮(HPF)，但是對其激活CFTR氯離子通道的機(jī)制尚不明確。

3、
　　本研究利用細(xì)胞熒光淬滅模型測定了HTF、HXF和HPF對野生型和突變型（Wt-CFTR和ΔF508-CFTR）CFTR Cl-通道的激活活性;利用短路電流技術(shù)，對HTF和HXF激起大鼠結(jié)腸粘膜短路電流進(jìn)行了分析;動物離體實(shí)驗(yàn)中，測定了HTF、HXF和HPF對小鼠口咽部粘膜下腺液體分泌的作用;同時利用噻唑藍(lán)試驗(yàn)（MTT法）測定HTF和HXF對FRT細(xì)胞是否產(chǎn)生毒性。淬滅實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HTF、HXF和HPF能夠以濃度依賴的方式激活

4、CFTR氯離子通道，其對Cl-的轉(zhuǎn)運(yùn)活性具有迅速、可逆的特點(diǎn)，并且這種激活作用能被CFTR金標(biāo)準(zhǔn)CFTRinh-172全部抑制。作用機(jī)制研究表明:HTF、HXF和HPF對CFTR氯離子通道的激活具有毛喉素(forskolin，F(xiàn)SK)依賴的關(guān)系并且與FSK和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-Isobutyl-1-methylx，IBMX)存在相加效應(yīng)，但其與三羥基異黃酮(Genistein，GEN)不存在協(xié)同作用，表明這些化合物激活CFT

5、R Cl-通道機(jī)制為:HTF、HXF和HPF是通過提高cAMP水平和與CFTR翻譯產(chǎn)物—蛋白作用兩條途徑發(fā)揮CFTR Cl-通道激活作用。短路電流測定結(jié)果表明:HTF和HXF可以刺激大鼠結(jié)腸產(chǎn)生跨膜Cl-流，離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HTF、HXF和HPF能夠有效的刺激小鼠口咽部粘膜下腺液體分泌。細(xì)胞毒性檢測結(jié)果表明:HTF和HXF在24h未能對FRT細(xì)胞產(chǎn)生毒性。引人注目的是，HXF是迄今發(fā)現(xiàn)的親和力最高的黃酮類CFTR Cl-通道激活劑。以上