中國(guó)紅豆杉MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的克隆及功能研究.pdf

1、MYB轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中成員最多的蛋白超家族之一，廣泛參與調(diào)控植物的次生代謝及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生等生命活動(dòng)。目前，尚無(wú)關(guān)于紅豆杉MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究報(bào)道。紅豆杉細(xì)胞低產(chǎn)紫杉醇的問(wèn)題遲遲不能解決更增進(jìn)了研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控的需要。本文基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)從中國(guó)紅豆杉克隆了6個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子，并結(jié)合序列分析和超表達(dá)法對(duì)其功能展開(kāi)研究，取得了如下結(jié)果：
　　1）生物信息學(xué)分析顯示6個(gè)轉(zhuǎn)錄因子皆能定位在細(xì)胞核中且不穩(wěn)定存在；酵母激活和洋蔥表皮細(xì)胞亞細(xì)胞定

2、位實(shí)驗(yàn)證實(shí)Tc2RMYB2具有轉(zhuǎn)錄激活活性并且定位在細(xì)胞核中；聚類(lèi)分析將TcGARP2歸屬于一個(gè)尚未定義的GARP亞類(lèi)，同時(shí)在5個(gè)R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)現(xiàn)了三個(gè)新的保守域FIDFLGVGA domain、PTSLSLSLPG domain和MREMIAKEV domain，F(xiàn)IDFLGVGA domain可能在MYB轉(zhuǎn)錄因子的演化上參與位置決定。
　　2）超表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合半定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：Tc2RMYB4~6對(duì)查爾酮異構(gòu)

3、酶（CHI）的表達(dá)無(wú)影響，過(guò)量的Tc2RMYB3會(huì)使CHI輕微下調(diào)，這應(yīng)該與它們都不具有典型的類(lèi)黃酮上調(diào)結(jié)構(gòu)域SG7及SG7-2有關(guān)。紫杉醇合成酶DBAT和T13αH啟動(dòng)子富含MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件，但這兩個(gè)酶在Tc2RMYB3~6超表達(dá)后并沒(méi)有隨之增強(qiáng)表達(dá)。說(shuō)明MYB轉(zhuǎn)錄因子可能通過(guò)間接或與其他蛋白協(xié)同的方式來(lái)參與調(diào)控。
　　3）通過(guò)同源比對(duì)法從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并克隆到一個(gè)JAZ蛋白 TcJAZ3。Tc2RMYB4及其R2R3d