卵巢去細胞生物支架的制備及內(nèi)分泌功能評估.pdf

1、目的：
　　卵巢早衰患者時常面臨著過早絕經(jīng)的痛苦，其相關(guān)原因包括先天性和后天性，其中腫瘤相關(guān)的卵巢摘除手術(shù)和放化療損傷較為普遍。目前卵巢早衰的治療手段包括激素替代療法和卵巢冷凍技術(shù)。這些技術(shù)存在著致癌或重新將癌細胞導(dǎo)入體內(nèi)的風險。近年來，去細胞技術(shù)被越來越廣泛地應(yīng)用于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。這項技術(shù)主要通過移除組織中的細胞組分，保留細胞外基質(zhì)，為器官再生提供生物支架。本課題組的主要目的為研發(fā)新的異種卵巢去細胞方案，并評估其在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

2、價值。
　　方法：
　?、湃ゼ毎鞒蹋菏紫龋殉部焖賰鋈谌?，并切成約1.5mm的薄片。接著置于含有1％ Triton X-100的去離子水振蕩9小時，再置于含有0.5% SDS的去離子水中振蕩3小時。最后，將這些組織置于DNA酶中消化12小時。⑵卵巢支架組分及微觀結(jié)構(gòu)評估：使用H&E染色、DAPI熒光染色對去細胞生物支架的細胞組分殘留進行分析。使用阿辛藍染色、免疫組化染色分別對去細胞支架中的糖胺聚糖、膠原蛋白、纖維蛋白、層

3、粘連蛋白進行定性分析。使用DNA、糖胺聚糖、膠原蛋白試劑盒對上述物質(zhì)在去細胞支架中的含量進行定量分析。通過掃描電鏡對去細胞支架微觀結(jié)構(gòu)進行分析。⑶卵巢去細胞支架的生物安全性鑒定：通過CCK-8、細胞遷移實驗、大鼠皮下移植對去細胞支架的生物安全性進行評估。⑷去細胞支架內(nèi)分泌功能的評估：使用大鼠卵巢組織與去細胞卵巢組織構(gòu)建共培養(yǎng)體系，評估卵巢顆粒細胞在去細胞支架上的浸潤和內(nèi)分泌功能。
　　結(jié)論：
　　研發(fā)了一套針對豬卵巢的去細胞