2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、纖維素在自然界中廣泛存在,而且含量豐富,是一種可再生資源,對解決能源短缺和資源枯竭具有重要意義。但是,我國的纖維素利用率很低,造成大量的浪費(fèi)。在纖維素的分解過程中,纖維素酶發(fā)揮非常大的作用,將纖維素最終分解為葡萄糖,使得纖維素能夠得到充分的利用。嗜熱革節(jié)孢是一種嗜熱真菌,能夠產(chǎn)生熱穩(wěn)定性酶,是纖維素的分解者之一。
  本研究對來自嗜熱革節(jié)孢的外切葡聚糖酶基因cbhk和β-葡萄糖苷酶基因bgk進(jìn)行克隆,并在畢赤酵母中進(jìn)行表達(dá),得到C

2、BHK和BGK重組酶。對重組酶進(jìn)行分離純化, SDS-PAGE電泳檢測蛋白分子量,外切葡聚糖酶CBHK的表觀分子量為72kDa,大于理論分子量50kDa,可能是糖基化造成的;β-葡萄糖苷酶BGK的分子量大小為55kDa與理論的分子量大小基本一致。
  改善酶活性對提高纖維素的降解具有十分重要的作用?;谑葻岣锕?jié)孢β-葡萄糖苷酶HiBG的結(jié)構(gòu),本研究對嗜熱革節(jié)孢β-葡萄糖苷酶活性位點(diǎn)進(jìn)口端的12個氨基酸殘基進(jìn)行定點(diǎn)突變。通過同源建模

3、,對來源于嗜熱革節(jié)孢的外切葡聚糖酶基因進(jìn)行四個位點(diǎn)的定點(diǎn)突變。并將它們在畢赤酵母中進(jìn)行了突變基因的高效表達(dá)。與野生型外切葡聚糖酶相比,突變體的酶活性都有所降低,其中W163H酶活性降低最多,降低了50%;E429D和Q459T分別降低了40%和35%;突變后W397H活性完全喪失。與野生型β-葡萄糖苷酶相比,所有突變體的酶活力都降低了,其中A260N、F348G、Y179F和F180H酶活性降低較少,分別降低了20%、20%、30%和3

4、0%;D237S、L173Q酶活性分別降低了55%和60%;而突變W168H、N335F和W349G的酶活性完全喪失。
  在纖維素的分解過程中,β-葡萄糖苷酶起著關(guān)鍵作用,酶的催化存在產(chǎn)物抑制現(xiàn)象,大多數(shù)酶都存在產(chǎn)物抑制現(xiàn)象,但是一些酶對葡萄糖具有耐受性。嗜熱革節(jié)孢糖苷水解酶第一家族β-葡萄糖苷酶對葡萄糖具有耐受性,但是具體的作用機(jī)制尚不清楚。本研究,通過對嗜熱革節(jié)孢糖苷水解酶第一家族β-葡萄糖苷酶的12個進(jìn)口端位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變

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