一些BcL-2家族蛋白的免標(biāo)記檢測(cè).pdf

1、當(dāng)代分析化學(xué)已上升到分析科學(xué)階段，生命活動(dòng)過(guò)程的監(jiān)測(cè)和生物大分子的檢測(cè)是其重要的研究方向之一。細(xì)胞凋亡是一個(gè)細(xì)胞程序化死亡過(guò)程，凋亡調(diào)控因子介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞耐藥是被廣泛認(rèn)可的細(xì)胞耐藥機(jī)制之一。Bcl-2家族蛋白是細(xì)胞凋亡重要的調(diào)節(jié)者，它們表達(dá)的變化與腫瘤細(xì)胞耐藥有密切的關(guān)系。本學(xué)位論文主要通過(guò)三種免標(biāo)記方法對(duì)Bcl-2蛋白家族成員中的Bcl-2和Bax蛋白進(jìn)行檢測(cè)，相關(guān)研究過(guò)程不涉及熒光小分子、熒光蛋白或放射性同位素等傳統(tǒng)的生物檢測(cè)標(biāo)記物

2、，具有簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)等特點(diǎn)，拓展了現(xiàn)代分析化學(xué)在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用范圍。主要工作如下:
　　1.制備了Bcl-2單抗—納米金復(fù)合物和Bcl-2蛋白修飾玻碳電極并對(duì)其進(jìn)行了表征?；诟?jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)基本原理，使用電化學(xué)交流阻抗技術(shù)，發(fā)展了一種靈敏的腫瘤細(xì)胞定量檢測(cè)的新方法，考察了乳腺癌細(xì)胞MCF-7和耐阿霉素乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADR表面Bcl-2蛋白表達(dá)水平的差異性。在優(yōu)化條件下，電子轉(zhuǎn)移電阻的變化值ΔRct與5×102-1.

3、6×106 cell mL-1范圍內(nèi)細(xì)胞濃度的對(duì)數(shù)值呈線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)限為170 cell mL-1。研究表明，Bcl-2蛋白在MCF-7/ADR細(xì)胞表面的表達(dá)量更大。
　　2.合成了電活性和生物兼容性俱佳的二茂鐵-殼聚糖(Fc-CS)凝膠，將Fc-CS電沉積至玻碳電極表面，利用納米金(Au NPs)將Bax單抗固定制成電化學(xué)探針—抗體修飾電極。由于空間位阻效應(yīng)，Bax蛋白與抗體之間的特異性結(jié)合阻礙了電極—電解質(zhì)溶液間電子轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致

4、DPV測(cè)量峰電流的降低。優(yōu)化條件下，峰電流差值ΔI與Bax蛋白濃度cBax在0.5-500 ng mL-1范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)限為0.15 ng mL-1。由此發(fā)展了一種簡(jiǎn)單、靈敏、無(wú)標(biāo)記的Bax蛋白電化學(xué)檢測(cè)方法。
　　3.在石英晶體微天平(QCM)金電極表面電化學(xué)聚合生成聚中性紅修飾膜，利用戊二醛固定Bax單抗分子，基于抗原—抗體之間的特異性結(jié)合，通過(guò)測(cè)量反應(yīng)前后石英晶體在氣相中的諧振頻移，發(fā)展了一種簡(jiǎn)單、靈敏、無(wú)標(biāo)記