一些BcL-2家族蛋白的免標記檢測.pdf

1、當代分析化學已上升到分析科學階段，生命活動過程的監(jiān)測和生物大分子的檢測是其重要的研究方向之一。細胞凋亡是一個細胞程序化死亡過程，凋亡調控因子介導的腫瘤細胞耐藥是被廣泛認可的細胞耐藥機制之一。Bcl-2家族蛋白是細胞凋亡重要的調節(jié)者，它們表達的變化與腫瘤細胞耐藥有密切的關系。本學位論文主要通過三種免標記方法對Bcl-2蛋白家族成員中的Bcl-2和Bax蛋白進行檢測，相關研究過程不涉及熒光小分子、熒光蛋白或放射性同位素等傳統(tǒng)的生物檢測標記物

2、，具有簡單、可操作性強等特點，拓展了現代分析化學在生命科學研究中的應用范圍。主要工作如下:
　　1.制備了Bcl-2單抗—納米金復合物和Bcl-2蛋白修飾玻碳電極并對其進行了表征?；诟偁幮悦庖叻磻驹?，使用電化學交流阻抗技術，發(fā)展了一種靈敏的腫瘤細胞定量檢測的新方法，考察了乳腺癌細胞MCF-7和耐阿霉素乳腺癌細胞MCF-7/ADR表面Bcl-2蛋白表達水平的差異性。在優(yōu)化條件下，電子轉移電阻的變化值ΔRct與5×102-1.

3、6×106 cell mL-1范圍內細胞濃度的對數值呈線性關系，檢測限為170 cell mL-1。研究表明，Bcl-2蛋白在MCF-7/ADR細胞表面的表達量更大。
　　2.合成了電活性和生物兼容性俱佳的二茂鐵-殼聚糖(Fc-CS)凝膠，將Fc-CS電沉積至玻碳電極表面，利用納米金(Au NPs)將Bax單抗固定制成電化學探針—抗體修飾電極。由于空間位阻效應，Bax蛋白與抗體之間的特異性結合阻礙了電極—電解質溶液間電子轉移，導致

4、DPV測量峰電流的降低。優(yōu)化條件下，峰電流差值ΔI與Bax蛋白濃度cBax在0.5-500 ng mL-1范圍內呈良好的線性關系，檢測限為0.15 ng mL-1。由此發(fā)展了一種簡單、靈敏、無標記的Bax蛋白電化學檢測方法。
　　3.在石英晶體微天平(QCM)金電極表面電化學聚合生成聚中性紅修飾膜，利用戊二醛固定Bax單抗分子，基于抗原—抗體之間的特異性結合，通過測量反應前后石英晶體在氣相中的諧振頻移，發(fā)展了一種簡單、靈敏、無標記