DNA甲基化在UVA誘導(dǎo)皮膚胚胎成纖維細(xì)胞慢性損傷中的作用.pdf

1、DNA甲基化在UVA誘導(dǎo)皮膚胚胎成纖維細(xì)胞慢性損傷中的作用重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文(學(xué)術(shù)學(xué)位)學(xué)生姓名：周斌指導(dǎo)教師：鐘莉教授專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)科門類：工學(xué)重慶大學(xué)生物工程學(xué)院二O一七年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要I摘要背景：背景：皮膚是身體對其環(huán)境如紫外線輻射和外源性化學(xué)物質(zhì)等有害因素的屏障。其中長期長波紫外線（UVA）輻射能引起皮膚慢性損傷，造成皮膚光老化，炎癥現(xiàn)象以及皮膚癌變。細(xì)胞內(nèi)DNA甲基化在UVA輻射下會(huì)發(fā)生改變，其中DN

2、A甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）在UVA輻射下的改變會(huì)參與細(xì)胞的生長、周期、癌變等調(diào)節(jié)。DNMTs在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞中受UVA輻射的影響，以及DNMTs的改變與細(xì)胞體內(nèi)的CCND表達(dá)的變化的關(guān)系是本文的創(chuàng)新點(diǎn)。目的：目的：在不同UVA劑量（25KJm2、50KJm2、100KJm2、150KJm2、200KJm2）對小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（NIH3T3）重復(fù)照射（每一次間隔24h）三次下，從蛋白水平和mRNA水平來檢測DNMTs的表達(dá)；檢測不

3、同濃度的5az（0.25M0.5M1.0M）對NIH3T3細(xì)胞活力的影響并和與UVA（100KJm2）聯(lián)合作用下對細(xì)胞活力的影響以及對細(xì)胞的慢性損傷。檢測細(xì)胞在5az處理聯(lián)合UVA誘導(dǎo)輻射作用下，DNMTs（DNMT1DNMT3aDNMT3b）表達(dá)水平。檢測5az處理聯(lián)合UVA誘導(dǎo)輻射作用下周期相關(guān)基因（CCND1CCND2）的表達(dá)變化。研究方法：研究方法：采用MTS法檢測UVA和5az對NIH3T3細(xì)胞活力的影響；采用實(shí)時(shí)定量PCR法

4、(qRTPCR)來檢測DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、CCND1、CCND2、HO1mRNA的表達(dá)水平變化。采用Westernblotting檢測DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、CCND1、CCND2、HO1等相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果：結(jié)果：1.多次有規(guī)律的UVA輻射下，NIH3T3細(xì)胞活力降低，且細(xì)胞活力降低的程度與UVA的劑量成劑量依賴性：對NIH3T3細(xì)胞進(jìn)行多次UVA輻射（相同劑量重復(fù)三次UVA輻射，每次照射間隔

5、24h）后，不同劑量使細(xì)胞的活力呈明顯的降低趨勢。在低劑量時(shí)候，降低的不明顯。但在高劑量輻射（100KJm2）后與非輻射組相比，，細(xì)胞的形態(tài)，以及細(xì)胞的活力皆呈明顯的降低趨勢。在大劑量輻射下（與對照組相比），在細(xì)胞的形態(tài)上細(xì)胞明顯皺縮并存在大量的細(xì)胞碎片。2.5az處理與UVA輻射聯(lián)合作用對小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（mouseembryonicfibroblast）的細(xì)胞各項(xiàng)指標(biāo)的影響:5az降低了細(xì)胞因UVA輻射誘導(dǎo)的DNMT1，DNMT3