葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78對人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：探討葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）對人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制，為闡明GRP78參與結(jié)直腸癌的致癌機(jī)制提供相關(guān)依據(jù)。
　　方法：構(gòu)建GRP78的shRNA慢病毒表達(dá)載體pLV-shRNA GRP78及陰性對照慢病毒表達(dá)載體pLV-control，分別轉(zhuǎn)染人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞系。MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的分布情況，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力，裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞體內(nèi)成瘤

2、能力。Affymetrix人全基因組表達(dá)芯片檢測GRP78表達(dá)抑制后，RKO細(xì)胞中基因表達(dá)譜的變化，對差異表達(dá)的基因進(jìn)行功能注釋和富集分析，繪制差異基因關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖。Western blot技術(shù)驗(yàn)證部分差異基因以確定結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染pLV-shRNA GRP78后，RKO細(xì)胞增殖能力及克隆形成數(shù)目明顯受到抑制（P＜0.05），但遷移能力沒有明顯變化（P>0.05）；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，沉默GRP78導(dǎo)致G1期細(xì)胞比

3、例顯著增加，而S期細(xì)胞比例顯著降低（P<0.05）；裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，沉默GRP78導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤能力顯著減弱（P<0.05）?；蛐酒瑱z測結(jié)果顯示，GRP78表達(dá)抑制后，共有397個(gè)基因的表達(dá)發(fā)生改變（與對照組相比，變化表達(dá)倍數(shù)≥1.2），其中上調(diào)的基因258個(gè)，下調(diào)139個(gè)。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)這些基因主要涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝、細(xì)胞凋亡等功能。通過生物信息學(xué)分析，篩選3個(gè)（CDKN2B，MTOR及BIRC3）