葡萄糖調節(jié)蛋白78對人結直腸癌RKO細胞增殖的影響及其機制的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討葡萄糖調節(jié)蛋白78(GRP78)對人結直腸癌RKO細胞增殖的影響及其機制,為闡明GRP78參與結直腸癌的致癌機制提供相關依據(jù)。
  方法:構建GRP78的shRNA慢病毒表達載體pLV-shRNA GRP78及陰性對照慢病毒表達載體pLV-control,分別轉染人結直腸癌RKO細胞系。MTT實驗和克隆形成實驗檢測細胞的增殖能力,流式細胞術檢測細胞周期的分布情況,劃痕實驗檢測細胞遷移能力,裸鼠皮下成瘤實驗檢測細胞體內成瘤

2、能力。Affymetrix人全基因組表達芯片檢測GRP78表達抑制后,RKO細胞中基因表達譜的變化,對差異表達的基因進行功能注釋和富集分析,繪制差異基因關系網(wǎng)絡圖。Western blot技術驗證部分差異基因以確定結果的可靠性。
  結果:轉染pLV-shRNA GRP78后,RKO細胞增殖能力及克隆形成數(shù)目明顯受到抑制(P<0.05),但遷移能力沒有明顯變化(P>0.05);流式細胞術檢測結果顯示,沉默GRP78導致G1期細胞比

3、例顯著增加,而S期細胞比例顯著降低(P<0.05);裸鼠成瘤實驗結果顯示,沉默GRP78導致腫瘤細胞在裸鼠皮下成瘤能力顯著減弱(P<0.05)。基因芯片檢測結果顯示,GRP78表達抑制后,共有397個基因的表達發(fā)生改變(與對照組相比,變化表達倍數(shù)≥1.2),其中上調的基因258個,下調139個。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)這些基因主要涉及信號轉導、細胞代謝、細胞凋亡等功能。通過生物信息學分析,篩選3個(CDKN2B,MTOR及BIRC3)

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