利用RNA干擾技術抑制人大腸癌RKO細胞系葡萄糖調節(jié)蛋白78表達的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]：構建GRP78靶向shRNA質粒表達載體(PGPU6/GFP/Neo-GRP78，shRNA-GRP78)，觀察其對人大腸癌RKO細胞系GRP78基因表達及對細胞增殖、轉移、凋亡生物學行為的影響。
　　 [方法]：使用脂質體Lipofectamine2000將GRP78靶向shRNA質粒表達載體( shRNA-GRP78)轉入人大腸癌RKO細胞系內，經G418篩選出穩(wěn)定轉染的陽性細胞。分別通過熒光定量PCR和Weste

2、rn-blotting技術檢測RKO細胞系中GRP78在mRNA和蛋白水平上的表達變化，挑選出表達抑制最強的穩(wěn)定轉染細胞系。通過xCELLigence系統(tǒng)檢測細胞的增值、遷移能力；流式細胞術檢測細胞凋亡變化情況。
　　 [結果]：GRP78靶向shRNA質粒表達載體(shRNA-GRP78)可以顯著下調GRP78mRNA及蛋白表達水平(P<0.05); GRP78基因的表達下調顯著抑制RKO細胞的體外增殖，并顯著增加RKO細胞的

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