電針對(duì)2型糖尿病合并腎性高血壓大鼠模型的療效研究.pdf

1、目的:本研究通過持續(xù)電針刺激2型糖尿病合并腎性高血壓模型大鼠的雙側(cè)足三里穴，來驗(yàn)證針灸對(duì)糖尿病合并腎性高血壓病早期的治療作用。實(shí)驗(yàn)首先建立2型糖尿病合并腎性高血壓病大鼠復(fù)合模型，并通過一系列生理、病理、影像學(xué)結(jié)果對(duì)該模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，確定該模型的穩(wěn)定性和可持續(xù)性;然后，給予復(fù)合模型大鼠持續(xù)的高頻電針刺激后，觀察大鼠血糖和血壓以及腎素、血管緊張素Ⅱ、糖化血紅蛋白值的改變，來判定電針對(duì)糖尿病合并腎性高血壓病的治療是否有效，并最終為臨床上2型糖尿

2、病合并腎性高血壓病的臨床治療和防治提供新的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　方法:第一部分 2型糖尿病合并腎性高血壓病大鼠模型的制作及評(píng)價(jià)
　　首先，給予造模大鼠高脂高糖膳食，空白對(duì)照組大鼠給予普通膳食。4W后對(duì)造模大鼠進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)，待其形成胰島素抵抗后，按STZ溶液28mg/kg劑量腹腔注射（冰浴避光下，將STZ溶于PH4.2-4.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中，配置濃度為1％）?？瞻讓?duì)照組大鼠注射等體積的檸檬酸-

3、檸檬酸鈉緩沖液。2周后，連續(xù)3天均測(cè)得FBG≥7.8mmol/L或RBG≥16.7mmol/L，為2型糖尿病模型成模標(biāo)準(zhǔn)。
　　其次，將上述2型糖尿病成模大鼠隨機(jī)分為糖尿病組（即糖尿病大鼠）、假手術(shù)組（即糖尿病開腹未手術(shù)的大鼠）、復(fù)合模型組（即糖尿病并腎動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)的大鼠）。其中，復(fù)合模型組大鼠麻醉后固定，保持右側(cè)臥位，消毒備皮后鋪巾。在左側(cè)肋弓下緣平行于脊柱約1cm處向下剪開約2.0cm左右切口，逐層剪開至腹腔，將生理鹽水打濕后

4、的紗布包裹裸露的腎臟。充分暴露腎臟及腹主動(dòng)脈，同時(shí)確保腎蒂不能出現(xiàn)扭轉(zhuǎn)，用棉簽輕輕擦拭包裹腎動(dòng)、靜脈外側(cè)的筋膜，然后在腹主動(dòng)脈與腎動(dòng)脈的分叉處用玻璃分針將腎動(dòng)、靜脈分開，剝離約0.5-1.0cm的長(zhǎng)度，穿單線備用，把0.25mm直徑的針灸針置于腎動(dòng)脈一側(cè)并與腎動(dòng)脈平行，用3-0號(hào)縫合線結(jié)扎腎動(dòng)脈后抽出針灸針，術(shù)后常規(guī)抗炎一周。假手術(shù)組除不結(jié)扎左腎動(dòng)脈外，其余操作均同復(fù)合模型組。2周后，連續(xù)3天均測(cè)得大鼠SBP≥140mmHg，同時(shí)FBG

5、≥7.8mmol/L或RB G≥16.7mmo l/L，確定為2型糖尿病合并腎性高血壓模型。
　　最后運(yùn)用生理學(xué)，生物化學(xué)，解剖學(xué)，病理學(xué)，影像學(xué)等多重指標(biāo)對(duì)該模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　第二部分 電針對(duì)2型糖尿病合并腎性高血壓大鼠模型的療效研究
　　將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成5組，分別為空白組，單純糖尿病組，單純腎性高血壓組，復(fù)合模型未電針組，復(fù)合模型電針組（除復(fù)合模型的兩組大鼠沿用第一部分造模的大鼠外，其余各組大鼠均重新獲取、制備

6、）。分別對(duì)各組大鼠予持續(xù)高頻電針刺激后，檢測(cè)大鼠的血糖、血壓、糖化血紅蛋白、腎素、血管緊張素、病理等變化，并記錄各值。對(duì)比電針前后各組大鼠的生理、生化、病理等指標(biāo)，評(píng)估電針對(duì)2型糖尿病合并腎性高血壓病大鼠模型的療效。
　　結(jié)果:第一部分 2型糖尿病合并腎性高血壓病大鼠模型的制作及評(píng)價(jià)
　　1.一般行為觀察
　　空白對(duì)照組大鼠，毛發(fā)順滑干凈有光澤，精神狀態(tài)良好，體重隨飼養(yǎng)周期變化明顯增大;與空白對(duì)照組相比，其他三組大鼠采

7、食、飲水及大小便均增多，體重增長(zhǎng)較緩慢，部分出現(xiàn)體重減輕。與糖尿病組和假手術(shù)組大鼠相比，復(fù)合模型組大鼠精神較緊張，毛色缺少光澤，局部毛發(fā)變黃易脫落，抓持時(shí)遺尿排便現(xiàn)象較普遍，大便質(zhì)軟甚至稀便，腐臭味明顯，尿量及糞量均增加。
　　2.大鼠體重變化
　　造模前各組大鼠體重?zé)o差異，當(dāng)造模大鼠給予高脂高糖膳食后，其體重較普通膳食的空白對(duì)照組大鼠有明顯增加，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。STZ造模后，空白對(duì)照組大鼠體重繼續(xù)增加，造

8、模大鼠體重則逐漸降低，各組間差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.OGTT，F(xiàn)BG及GHbA1c值的變化
　　大鼠OGTT的變化。結(jié)果顯示:空白對(duì)照組大鼠0.5h、1h及2h血糖先升高后降低，2h后血糖降為正常值，造模大鼠血糖也是先升高后降低，2h血糖也降為正常，但造模大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的血糖有差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。大鼠FBG的變化。造模前及給予高脂高糖膳食4周后，兩組大鼠空腹血糖均無明顯差異(P

9、＞0.05); STZ造模后，造模組血糖較空白對(duì)照組明顯升高，兩者之間有顯著性差異(P＜0.01)。大鼠GHbA1c的變化。所有大鼠眼眶靜脈采血后，分離血清，測(cè)定糖化血紅蛋白濃度。造模大鼠較空白對(duì)照組大鼠糖化血紅蛋白濃度值明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.血壓測(cè)量結(jié)果
　　與前三組相比，復(fù)合模型組大鼠收縮壓和舒張壓值明顯升高，均有顯著差異(P＜0.01);而空白對(duì)照組、糖尿病組及假手術(shù)組之間收縮壓和舒張壓均

10、無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5.彩超檢查
　　結(jié)果:編號(hào)A、B、C、D的腎臟大小分別為2.19×1.01cm，2.32×1.08cm，2.15×1.06cm和1.39×0.70cm;前三組的腎臟大小明顯大于復(fù)合模型組，提示復(fù)合模型組大鼠腎動(dòng)脈結(jié)扎后腎臟出現(xiàn)萎縮變小。編號(hào)E、F、G、H中PSV、EDV為血流速度，RI為血管阻力，前三組血流速度大于復(fù)合模型組，而血管阻力則小于復(fù)合模型組，提示復(fù)合模型組大鼠結(jié)扎

11、腎動(dòng)脈后，腎動(dòng)脈血管直徑變小，血流量減少。
　　6.血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)值比較
　　所有大鼠采血后測(cè)定Cr，BUN值。各組之間的腎功能(Cr、BUN)均無明顯差異(P＞0.05)。
　　7.病理學(xué)觀察
　　胰腺HE染色和左腎的HE染色。
　　第二部分 電針對(duì)2型糖尿病合并腎性高血壓大鼠模型的療效研究
　　1.一般行為觀察
　　空白組及單純腎性高血壓大鼠，精神狀態(tài)良好，毛發(fā)順滑干凈有光

12、澤，體重隨飼養(yǎng)時(shí)間而增大;與以上兩組相比，其他三組大鼠采食、飲水及大小便均增多，體重增長(zhǎng)較慢，甚至部分出現(xiàn)體重減輕;另外，復(fù)合模型未電針組大鼠與其他組大鼠相比，精神更緊張，毛色缺少光澤，局部毛發(fā)變黃易脫落，抓持時(shí)遺尿排便現(xiàn)象較普遍，大便質(zhì)軟甚至稀便，腐臭味明顯，尿量及糞量均增加。電針干預(yù)后，復(fù)合模型電針組大鼠部分狀態(tài)較差，同時(shí)伴兩側(cè)膝關(guān)節(jié)處淤血紅腫，其余各組大鼠無明顯異常。
　　2.大鼠FBG的變化
　　經(jīng)重復(fù)測(cè)量資料的方差

13、分析結(jié)果可得:不同組間的FBG值均有差異(P＜0.05)。經(jīng)兩兩比較，電針干預(yù)1周后，單純糖尿病組和復(fù)合模型電針組與電針干預(yù)前相比，兩組大鼠空腹血糖均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.01);電針干預(yù)2周后，單純糖尿病組和復(fù)合模型電針組大鼠與電針干預(yù)前相比，空腹血糖也出現(xiàn)了明顯下降(P＜0.01)。空白組、單純腎性高血壓組及復(fù)合模型未電針組電針干預(yù)前后，大鼠空腹血糖值均無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.血壓測(cè)量結(jié)果
　　經(jīng)重復(fù)測(cè)量資

14、料的方差分析結(jié)果可得:不同組間的血壓值均有差異(P＜0.05)。經(jīng)兩兩比較，電針干預(yù)1周后，單純腎性高血壓組和復(fù)合模型電針組大鼠與電針干預(yù)前相比，收縮壓及舒張壓均有顯著差異(P＜0.01);而空白組、單純糖尿病組及復(fù)合模型未電針組之間收縮壓和舒張壓均無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.大鼠GHbA1c、PRA、AngⅡ值的變化
　　所有大鼠眼眶靜脈采血后，分離血清。測(cè)定各組大鼠電針干預(yù)前、1周后及2周后的糖化

15、血紅蛋白(GHbA1c)、腎素(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的濃度。經(jīng)重復(fù)測(cè)量資料的方差分析結(jié)果可得:不同組間的GHbA1c、PRA、AngⅡ值均有差異(P＜0.05)。經(jīng)兩兩比較，電針干預(yù)1周后，單純糖尿病組和復(fù)合模型電針組與電針干預(yù)前相比，兩組大鼠GHbA1c水平均出現(xiàn)明顯下降，(P＜0.01);電針干預(yù)2周后，單純糖尿病組和復(fù)合模型電針組大鼠與電針干預(yù)前相比，GHbA1c水平也出現(xiàn)了明顯下降，(P＜0.01);另外，電針干預(yù)

16、1周后，單純腎性高血壓組和復(fù)合模型電針組與電針干預(yù)前相比，兩組大鼠PRA、AngⅡ水平也均出現(xiàn)明顯下降，(P＜0.01);電針干預(yù)2周后，單純糖尿病組和復(fù)合模型電針組大鼠與電針干預(yù)前相比，PRA、AngⅡ水平明顯下降，(P＜0.01)。
　　5.尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)值比較
　　大鼠采血后分離血清，測(cè)定Cr，BUN值。各組之間的腎功能(BUN、Cr)均無明顯差異(P＞0.05)。
　　6.病理學(xué)觀察。胰腺HE