蛋白酶Nexin-1在結(jié)腸癌中對Sonic Hedgehog表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　明確蛋白酶Nexin-1（PN-1）在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況及其與Sonic Hedgehog（SHH）的關(guān)系。
　　方法：
　　用慢病毒包裝BRAF-V600E質(zhì)粒和空載體（vector）質(zhì)粒并感染結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞 NCM460，經(jīng)嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定表達(dá)BRAF突變和空載體的細(xì)胞（分別記為NCM460-BRAFV600E細(xì)胞和NCM460-vector細(xì)胞）,然后采用western blot檢測BRAF-V6

2、00E蛋白及其下游的p-MEK蛋白表達(dá)情況以確認(rèn)轉(zhuǎn)錄成功，之后采用熒光定量PCR檢測PN-1、SHH和GLI1在兩組細(xì)胞中的相對表達(dá)量。采用熒光定量PCR檢測PN-1和SHH在五組結(jié)腸癌細(xì)胞系（RKO，HT29，HCT116，SW480，LOVO）中的相對表達(dá)量；選擇PN-1表達(dá)最高和最低的細(xì)胞系分別沉默和過表達(dá)PN-1，并檢測SHH的表達(dá)水平變化。在人結(jié)腸癌組織及癌旁組織中采用免疫組織化學(xué)方法檢測PN-1、SHH的表達(dá)情況并分析。

3、r>　　結(jié)果：
　　NCM460-BRAFV600E細(xì)胞比NCM460-vector細(xì)胞和空白對照組NCM460細(xì)胞 BRAF、p-MEK表達(dá)明顯升高，表明轉(zhuǎn)染成功。NCM460-BRAFV600E細(xì)胞比NCM460-vector細(xì)胞中PN-1表達(dá)明顯升高（P＜0.05），而SHH及GLI1則明顯表達(dá)降低（P＜0.05）。五組結(jié)腸癌細(xì)胞系中PN-1和SHH均有不同程度的表達(dá)，PN-1表達(dá)最高的是 LOVO，最低的是 RKO；SHH