蛋白酶Nexin-1通過(guò)抑制凋亡抑制蛋白XIAP促進(jìn)AML細(xì)胞對(duì)阿糖胞苷的敏感性.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)和探索蛋白酶Nexin-1（PN1）在急性髓系白血病（AML）細(xì)胞中的表達(dá)及其作用，同時(shí)驗(yàn)證在AML中PN1對(duì)凋亡抑制蛋白XIAP的抑制作用。進(jìn)而探索和驗(yàn)證PN1是否通過(guò)抑制AML細(xì)胞中XIAP的表達(dá)來(lái)促進(jìn)AML對(duì)阿糖胞苷的敏感性，為解決AML治療中的阿糖胞苷耐藥問(wèn)題提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：
　　通過(guò)電轉(zhuǎn)染和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法分別將PN1質(zhì)粒及siRNA整合入AML細(xì)胞中，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR

2、和Western Blot檢測(cè)AML細(xì)胞系中PN-1、XIAP的相對(duì)表達(dá)，采用PI-AnnexinV標(biāo)記細(xì)胞和流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。利用CCK8試劑檢測(cè)細(xì)胞增值，確定阿糖胞苷作用于AML細(xì)胞的最適濃度及時(shí)間；電轉(zhuǎn)染PN1質(zhì)粒同時(shí)加阿糖胞苷處理AML細(xì)胞后，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況以判斷AML對(duì)阿糖胞苷敏感性，同時(shí)檢測(cè)PN1和XIAP的表達(dá)以確定其作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　PN1在五株AML細(xì)胞系中均有表達(dá)，且表達(dá)水平不同

3、。上調(diào)PN1后AML細(xì)胞的凋亡增加，且AML細(xì)胞內(nèi)XIAP的RNA水平及蛋白水平均降低，下調(diào)PN1后結(jié)果相反。經(jīng)阿糖胞苷處理后，AML細(xì)胞中XIAP的表達(dá)升高。阿糖胞苷處理聯(lián)合轉(zhuǎn)染PN1后，細(xì)胞內(nèi)XIAP較阿糖胞苷單獨(dú)處理組低，且細(xì)胞凋亡較高。即上調(diào)的PN1可以抑制阿糖胞苷誘導(dǎo)的XIAP的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　PN1可誘導(dǎo)AML細(xì)胞系發(fā)生凋亡，是AML細(xì)胞內(nèi)XIAP的天然抑制子。PN1可抑制阿糖胞苷誘導(dǎo)的AML細(xì)胞內(nèi)XIA