急性冠脈綜合征患者外周血單核細胞TLR 4和CRP的相關性研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病的病理基礎，其發(fā)病機制備受關注但至今尚未闡明。近年來研究表明，AS是一個慢性炎癥免疫過程，炎癥參與動脈粥樣硬化的形成和斑塊破裂過程，炎癥和免疫反應不僅在動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，而且在易損斑塊的發(fā)生、發(fā)展與易損斑塊破裂中也起著關鍵的作用。各種心血管危險因素通過炎癥和免疫反應損傷血管，許多炎癥細胞如單核細胞參與斑塊的形成，其中炎性受體發(fā)揮了重要作用。TOLL

2、樣受體(Toll—like receptors，TLRs)是近年來克隆出來的跨膜信號轉導受體家族，是連接先天免疫和特異性免疫的紐帶。最近對Toll樣受體4(Toll—like receptor4，TLR4)在AS中作用的研究成為新的研究熱點。 TLR4表達于所有的細胞系，在外周血淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞均有表達，以單核細胞表達為主，TLR4可以識別多種內源性和外源性配體，如脂多糖(lipopolysa—ccharide，

3、LPS)、熱休克蛋白(heat shock proteins，HSP)等。TLR4可通過LPS信號通道，介導炎癥反應，產生腫瘤壞死因子—α(Tumor necrosis factor，TNF—α)、白介素—6(interleukin—6，IL—6)等多種促炎癥因子，可引起局部或全身性的炎癥損傷[3]，是導致炎癥性損害的主要環(huán)節(jié)。由于TLR4在識別LPS及介導的炎癥反應信號轉導中的重要作用，其作為炎癥跨膜受體在心血管疾病中的作用也越來越多

4、的引起關注。實驗研究表明，TLR4參與了AS的形成和發(fā)展，但TLR4在炎癥、免疫反應中的分子生物學機制至今還未闡明。 C反應蛋白(C reactive protein，CRP)通常作為獨特的炎性標記物來檢測炎癥反應性疾病，其被認為是炎癥標志物中預測冠脈事件的最強指標。實驗證明：CRP不僅是理想的炎癥標志物和心血管疾病發(fā)生發(fā)展的強有力預測因子，還可以作為動脈粥樣硬化中炎性活化因子，導致內皮活化和單核巨噬細胞聚集，在炎癥及動脈粥樣

5、硬化發(fā)生發(fā)展過程中也起到重要的作用。但是，CRP在易損斑塊和易損斑塊破裂的炎癥機制中所扮演的角色尚未明了，是否屬與TLR4相關，是否通過TLR4模式受體介導而產生炎癥反應，尚未見明確報道。 研究目的： 1.觀察急性冠脈綜合征患者(Acute coronary syndrome，ACS)、穩(wěn)定型心絞痛(Stable angina pectoris，SAP)患者和對照組血漿內毒素水平，了解ACS患者血漿內毒素水平與其他組的異

6、同； 2.檢測冠心病患者外周血白細胞分化抗原14陽性(Cluster of differentiation-14，CD14+)單核細胞TLR4蛋白、mRNA和髓樣分化蛋白2(myeloid differentiation protein—2，MD—2) mRNA的表達變化； 3.了解ACS患者CRP與外周血CD14+單核細胞TLR4介導的炎癥反應的相關性。從而進一步探討CRP在ACS患者中的致炎作用，以及作用的細胞分子機

7、制。 4.觀察ACS患者CRP與血清炎性因子腫瘤壞死因子—α(tumor necrosis factor，TNF—α)濃度的相關性。 5.初步探討TLR4介導的信號通道在冠心病發(fā)病中的作用，了解其致炎作用的細胞分子機制，為臨床治療急性冠脈綜合征提供新的思路。 研究方法： 選擇45例經臨床診斷為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary artery disease，CAD)的患者，其診斷根據典型的臨床表現

8、、心肌酶學、心電圖等指標，符合世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)關于冠心病的診斷標準。急性冠脈綜合征組25例，其中急性心肌梗死16例，男9例，女7例；不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)9例，男5例，女4例，ACS組的平均年齡63.5±11.1歲；穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)組20例，男11例，女9例，平均年齡62.7±

9、10.6歲；對照組共入選20例體檢者，既往無冠心病史，血常規(guī)、血脂、肝腎功能指標均正常，無其他自身免疫性疾病及感染性疾病表現，其中男13例，女7例，平均年齡61.2±11.6歲。 以上入選者于入院時采集外周靜脈血14ml，提取單核細胞，進行單核細胞培養(yǎng)并收集血漿、血清備用。用流式細胞儀檢測單核細胞TLR4的表達；運用逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription polymerase chain reaction

10、，RT—PCR)法和實時定量PCR(Real—time quantitative polymerase chain reaction)測定入選者的外周血單核細胞TLR4mRNA、MD—2 mRNA表達；血漿LPS含量用鱟試劑法檢測；凝集法檢測血清CRP水平；血清TNF—α的濃度測定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme—linked immunsorbent assay，ELISA)；全自動生化分析儀測定所有入選者血脂水平。

11、 統(tǒng)計學分析：三組間比較用One—Way ANOVA單因素方差分析，兩兩間比較用LSD—t(least significant difference，LSD—t)檢驗。計量資料采用直線相關分析和偏相關分析，P<0.05認為有統(tǒng)計學顯著性差異。應用SPSS For Windows13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。 結論： 1.ACS患者外周血CD14+單核細胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA及MD—2mRNA的表達顯著高于S

12、AP組及對照組。 2.ACS組與SAP組、對照組血漿內毒素水平無顯著性差異；ACS組血清CRP、TNF—α濃度顯著高于SAP組及對照組。 3.直線相關和偏相關分析顯示：ACS患者血漿LPS水平與外周血CD14+單核細胞TLR4 mRNA無顯著相關性；血清CRP水平與外周血CD14+單核細胞TLR4蛋白表達、血清TNF—α水平呈顯著性正相關。 4.ACS患者外周血CD14+單核細胞TLR4 mRNA和MD—2 mR