MMP-8及MMP-9對角膜混濁度的影響.pdf

1、目的：
　　探討MMP-8、MMP-9對角膜混濁度的影響；比較MMP-8及MMP-9對角膜基質(zhì)膠原的破壞作用。
　　方法：
　　選取角膜正常的C57BL/6J小鼠8只，共16只角膜，經(jīng)腹腔麻醉后脫頸椎法處死，2 mm角膜環(huán)鉆取中央角膜，用于體外實(shí)驗(yàn)。將角膜隨機(jī)分4組，MMP-8組、MMP-9組為實(shí)驗(yàn)組，Assay Buffer組為陰性對照組，生理鹽水組為空白對照組，分別加入到含100μL的20 ng/μL MMP-8、

2、20 ng/μL MMP-9、Assay Buffer、生理鹽水的96孔板中，36.5℃孵育24 h后取出，測定各個(gè)角膜的羥脯氨酸濃度；選取角膜正常的C57BL/6J小鼠30只，共60只角膜，用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將小鼠分3組，MMP-8組、MMP-9組為實(shí)驗(yàn)組，生理鹽水組為對照組，分別給予角膜基質(zhì)內(nèi)注射約10μL的20 ng/μL MMP-8、20 ng/μL MMP-9及生理鹽水，分別于注射前（0 h）及注射后4、8、12、20、24 h進(jìn)

3、行混濁度評分、二次諧波掃描角膜基質(zhì)信號強(qiáng)度，并于8 h、24 h分別經(jīng)腹腔麻醉后脫頸椎法處死，取角膜進(jìn)行羥脯氨酸濃度測定。
　　結(jié)果：
　　體外實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組角膜羥脯氨酸濃度明顯低于陰性對照組（F=451.492， P=0.000）及空白對照組（F=252.403，P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MMP-8組角膜羥脯氨酸濃度明顯低于MMP-9組（F=55.184，P=0.002），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，0 h實(shí)驗(yàn)

4、組與對照組角膜混濁度無明顯差異（χ2=0.000， P=1.000）。4、8、12、20、24 h實(shí)驗(yàn)組角膜較對照組角膜明顯混濁，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），MMP-8組較MMP-9組角膜混濁度無明顯差異（P>0.05）。0 h二次諧波掃描實(shí)驗(yàn)組與對照組角膜基質(zhì)信號強(qiáng)度無明顯差異（P>0.05）。4、8、12、20、24 h，實(shí)驗(yàn)組角膜基質(zhì)信號強(qiáng)度均明顯低于對照組，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），MMP-8組與MMP-9組相比較

5、，結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。8 h對小鼠角膜取材進(jìn)行羥脯氨酸濃度測定，實(shí)驗(yàn)組角膜羥脯氨酸濃度明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=17.877，P<0.001），MMP-8組與MMP-9組相比較，結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。24 h對小鼠角膜取材進(jìn)行羥脯氨酸濃度測定，實(shí)驗(yàn)組角膜羥脯氨酸濃度明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=41.400，P<0.001），MMP-8組與MMP-9組相比較，結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

6、>0.05）。MMP-8組SHG角膜基質(zhì)信號強(qiáng)度與角膜混濁度臨床評分之間呈明顯負(fù)相關(guān)（rs=-0.511，P<0.001），MMP-9組SHG角膜基質(zhì)信號強(qiáng)度與角膜混濁度臨床評分之間呈明顯負(fù)相關(guān)（rs=-0.613，P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　MMP-8及MMP-9可降解角膜基質(zhì)中的膠原纖維，導(dǎo)致角膜基質(zhì)膠原纖維排列紊亂，角膜混濁度升高；體外實(shí)驗(yàn)中，同一質(zhì)量濃度的MMP-9較MMP-8有更強(qiáng)的降解角膜基質(zhì)膠原的能力；