高糖及糖濃度波動(dòng)對(duì)單核巨噬細(xì)胞分泌MMP-9的影響.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)采用不同的葡萄糖濃度的培養(yǎng)液以及甘露醇培養(yǎng)液孵育人單核巨噬細(xì)胞，觀察在不同的環(huán)境中單核巨噬細(xì)胞表達(dá)MMP-9的不同，探討不同的葡萄糖濃度及糖濃度波動(dòng)對(duì)單核巨噬細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的影響以及滲透壓改變是否參與了這一過(guò)程。旨在探討高糖及糖波動(dòng)促發(fā)糖尿病大血管病變的作用機(jī)制，為糖尿病大血管并發(fā)癥的治療提供新的方向及理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)：于-80℃

2、冰箱中取出THP-1細(xì)胞株，在超凈工作臺(tái)內(nèi)解凍復(fù)蘇后接種于培養(yǎng)瓶中，置于5％CO2培養(yǎng)箱中孵育（37℃）。培養(yǎng)的單核細(xì)胞采用胎盤(pán)藍(lán)染色法計(jì)算細(xì)胞活率。
　　 2.單核巨噬細(xì)胞的獲得：THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)至濃度為105/ml時(shí)經(jīng)乙酸肉豆蔻佛波酯（P M A）孵育48后被誘導(dǎo)成單核巨噬細(xì)胞。
　　 3.單核巨噬細(xì)胞的鑒定：采用雞紅細(xì)胞吞噬法對(duì)單核巨噬細(xì)胞進(jìn)行功能鑒定。
　　 4.實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)葡萄糖濃度及其變化分為對(duì)

3、照組（5mmol/L）、高葡萄糖組（15mmol/L）、葡萄糖濃度波動(dòng)組（5-15mmol/L）及滲透壓控制組（甘露醇濃度5-15mmol/L）。
　　 5.MMP-9的檢測(cè)：RT-PCR測(cè)定各組MMP-9 mRNA的表達(dá)，并比較各組間有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.高糖組、糖波動(dòng)組及甘露醇組單核巨噬細(xì)胞內(nèi)MMP-9的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；
　　 2.糖波動(dòng)組MMP-9的表達(dá)明顯

4、高于高糖組[（0.897±0.030 vs0.627±0.041），（P<0.01）]；
　　 3.滲透壓控制組MMP-9表達(dá)介于高葡萄糖組與葡萄糖濃度波動(dòng)組之間，與高葡萄糖組、葡萄糖濃度波動(dòng)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（0.8234-0.036 vs0.627±0.041），（0.823±0.036 Vs0.897±0.030）（P<0.01）]。
　　 結(jié)論：
　　 1.高葡萄糖濃度較低葡萄糖促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞內(nèi)MMP