甘草耐鹽內(nèi)生真菌分離、抗氧化活性及次生代謝物研究.pdf

1、目的：對甘草耐鹽內(nèi)生真菌進行分離、純化，初篩發(fā)酵產(chǎn)物中可能含甘草黃酮的耐鹽內(nèi)生真菌；對內(nèi)生真菌發(fā)酵物進行抗氧化活性篩選及活性菌株次生代謝產(chǎn)物分析；最后考察植物生長調(diào)節(jié)劑茉莉酸甲酯對活性菌株10-2-G-4發(fā)酵物中甘草查爾酮A的誘導調(diào)控作用，為尋找甘草可替代資源奠定基礎。
　　方法：采用組織分離法，在傳統(tǒng)PDA培養(yǎng)基和耐鹽PDA培養(yǎng)基上分離、純化內(nèi)生真菌，于真菌培養(yǎng)箱中28℃條件下培養(yǎng)3-7d；對發(fā)酵產(chǎn)物進行定性分析（TLC、HPL

2、C-UV及HPLC-FLD），尋找可能產(chǎn)甘草黃酮的內(nèi)生真菌；采用DPPH自由基試驗，考察其抗氧化活性；采用HPLC-FLD法，檢測不同茉莉酸甲酯濃度（20、40、60、80、100μmol/L）及不同添加時間（第0、3、7d）組，菌株10-2-G-4發(fā)酵物中的甘草查爾酮A，初步考察其誘導調(diào)控作用。
　　結(jié)果：共得到108株內(nèi)生真菌，其中常規(guī)組25株，耐鹽組83株（其中3％組內(nèi)生真菌24株，占總菌株數(shù)的22.2%；5%組16株，占總

3、菌株數(shù)的14.8%；8%組20株，占總菌數(shù)的18.5%；10%組23株，占總菌株數(shù)的21.3%；TLC初步篩選出31株可能含有甘草黃酮的內(nèi)生真菌，其中3%組4株，占12.9%；5%組2株，占6.5%；8%組10株，占32.3%；10%組15株，占48.4%。
　　DPPH抗氧化實驗表明菌株3-6-G-3、8-2-G-3、8-4-Y-3、10-2-G-4、10-5-Y-3、10-6-J-2、3-5-Y-1、8-4-G-1、8-4-J

4、-4、8-5-G-3、10-2-G-2、10-2-G-3以及10-5-J-1發(fā)酵物的乙酸乙酯層，菌株10-2-G-3、5-5-J-4、10-4-Y-3發(fā)酵物的菌絲層及菌株8-2-G-4發(fā)酵物的正丁醇層均有顯著的抗氧化活性，其活性與甘草總黃酮相當，8%、10%鹽濃度下得到更多的活性菌株。
　　發(fā)酵過程中可能產(chǎn)甘草苷的有7株（3-5-Y-1、8-4-G-1、8-4-Y-3、8-4-J-4、8-5-Y-2、10-2-G-3、10-6-J

5、-2），產(chǎn)異甘草苷的3株（3-6-G-3、8-5-G-4、8-5-Y-2），產(chǎn)甘草素的3株（10-4-Y-1、10-5-J-1、10-4-Y-3），產(chǎn)甘草查爾酮A的3株（10-2-G-4、10-6-J-1、10-6-J-2），產(chǎn)刺甘草查爾酮的1株（8-2-G-3）。
　　在發(fā)酵第3或第7d，分別加入100μmol/L的茉莉酸甲酯后，菌株10-2-G-4發(fā)酵物的乙酸乙酯層、菌絲層均檢測到甘草查爾酮A，發(fā)酵第3d加入茉莉酸甲酯甘草查爾