香樟果實(shí)酪氨酸酶的分離、純化和性質(zhì)分析.pdf

1、酪氨酸酶(EC1.14.18.1)是一種含銅的氧化還原酶，它廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中，與生物體內(nèi)的一些色素合成直接相關(guān)。酪氨酸酶具有重要的生理生化特征，在醫(yī)藥、環(huán)境、食品、精細(xì)化工等領(lǐng)域具有廣泛的用途。因此，研究酪氨酸酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)具有一定的理論和現(xiàn)實(shí)意義。 通過對(duì)幾十種植物材料進(jìn)行粗酶液提取、酶活力測定，確定香樟(Cinnamomumcamphora(L)Presl)果實(shí)為實(shí)驗(yàn)材料，確定酶活測定體系為：20mmol

2、/LpH7.5Tris-HCl緩沖液，10mmol/LL-DOPA。 研究了NAA，PEG，H2O2處理對(duì)香樟葉片和果實(shí)中酪氨酸酶活性及同工酶的影響，結(jié)果表明：10-4mol/L的NAA對(duì)果實(shí)成熟以及酪氨酸酶的酶活性都有一定的促進(jìn)作用；不同的滲透壓對(duì)香樟酪氨酸酶的形成和活力均呈現(xiàn)不同程度的影響；低濃度的H2O2(1mmol/L)處理可以誘導(dǎo)酪氨酸酶活力提高。 香樟果實(shí)經(jīng)過破碎、硫酸銨分級(jí)沉淀、SuperdexTM20

3、0凝膠過濾、DEAE-纖維素陰離子交換色譜分離純化后，得到一個(gè)電泳純的酪氨酸酶。此酶最適pH值為7.5，最適溫度為50℃，亞基分子量為43KDa。以L-DOPA為底物時(shí)，Km為12.83mmol/L，Vmax為180.65U/mg蛋白。 該酶熱穩(wěn)定性較好，在60℃保溫1h，仍能保持90％以上的酶活力；該酶在pH4-7的范圍內(nèi)穩(wěn)定：添加二肽Ala-Asp和Lys-Val在80℃保溫30min后，兩種二肽均表現(xiàn)出一定程度的保護(hù)作用