馬鈴薯酪氨酸酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、本文從馬鈴薯中分離純化出酪氨酸酶，并對其理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。首先用乙酸-乙酸鈉緩沖液對馬鈴薯勻漿抽提，經(jīng)分段鹽析，DEAE-Sepharose.F.F離子交換柱層析，SephadexG-150分子篩層析等純化步驟，所獲酶液經(jīng)SDS-PAGE檢驗(yàn)為單一蛋白區(qū)帶。　　馬鈴薯酪氨酸酶具有單酚酶和二酚酶活性，用L-酪氨酸、L-3，4二羥基苯丙氨酸、鄰苯二酚和氯原酸為底物，測得其單酚酶活性較低，并且在純化過程中活性喪失很快，而二酚酶活性較高并且

2、較為穩(wěn)定，其中以鄰苯二酚為底物時(shí)活性最高。酪氨酸酶是一種金屬酶，選用Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Hg2+、Zn2+、Fe2+八種金屬離子和EDTA作用于酪氨酸酶，發(fā)現(xiàn)Na+無顯著作用，K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Hg2+對酶具有不同程度的抑制作用，其中Hg2+的抑制作用最強(qiáng)，而Zn2+、Fe2+具有不同程度的激活作用。選用CaCl2和KCl作為抑制劑，以L-DOPA為底物，表明CaCl2屬非競爭性抑制，KCl為競

3、爭性抑制，用Lineweaver-Burk作圖法求得其抑　　制常數(shù)Ki分別為11.68mmol/L和10mmol/L。EDTA是一種金屬離子螯和劑，在0.5mmol/L濃度水平上對酶活抑制率達(dá)到56％。　　巰基類化合物、抗壞血酸和曲酸對酶具有較強(qiáng)的抑制作用，同一濃度范圍內(nèi)它們對酶的抑制強(qiáng)弱依次為二硫蘇糖醇＞β-巰基乙醇＞L-谷胱甘肽＞L-半胱氨酸＞抗壞血酸＞曲酸＞硫脲。選用曲酸進(jìn)行酶活抑制機(jī)理研究，預(yù)處理溫度和預(yù)處理時(shí)間對曲酸的抑制