二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系脂聯(lián)素表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　子宮內(nèi)膜癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，約占女性腫瘤患者的7％，且近年來(lái)其發(fā)病率有上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害女性健康。但是該病的發(fā)病機(jī)制目前仍然不確切，僅證明肥胖、糖尿病、高血壓及多囊卵巢綜合征(PCOS)等與其發(fā)病高度相關(guān)。肥胖特別是上腹部肥胖是子宮內(nèi)膜癌的危險(xiǎn)因素，已得到流行病學(xué)研究的支持。肥胖者體內(nèi)脂肪組織可分泌較多的脂肪因子，但是僅有脂聯(lián)素的水平卻較正常人低。同時(shí)研究表明血漿中的脂聯(lián)素水平與子宮內(nèi)膜癌呈負(fù)相關(guān)。而且脂聯(lián)素

2、通過(guò)與其特異性受體結(jié)合，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這提示它有抗腫瘤的作用。脂聯(lián)素基因啟動(dòng)子上游存在豐富的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，F(xiàn)OXO1（叉頭框蛋白O1）能通過(guò)結(jié)合C/EBP(CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白)增強(qiáng)脂聯(lián)素基因的轉(zhuǎn)錄。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病的一線治療藥物二甲雙胍可糾正患者體內(nèi)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，進(jìn)而影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展，而這一作用是通過(guò)AMPK信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。因此，本課題擬探討在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A和Ishikaw

3、a中，二甲雙胍能否通過(guò)AMPK/mTORC1增加FOXO1的水平進(jìn)而增加脂聯(lián)素的表達(dá)，為子宮內(nèi)膜癌的診治提供新的思路。
　　材料：
　　本文以子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A（中分化）和Ishikawa（IK，高分化)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。兩個(gè)細(xì)胞系均由魏麗慧教授(北京大學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室)惠贈(zèng)。分別用含10%胎牛血清的DMEM-高糖和DMEM/F12培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞系常規(guī)傳代。
　　方法

4、　　1.CCK-8檢測(cè)二甲雙胍以不同濃度作用不同時(shí)間后，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A和Ishikawa的增殖率變化；
　　2.RT-PCR檢測(cè)二甲雙胍不同濃度處理HEC-1A和Ishikawa后，脂聯(lián)素mRNA表達(dá)水平的變化；
　　3.Western Blot檢測(cè)不同濃度二甲雙胍作用HEC-1A和Ishikawa后，F(xiàn)OXO1和脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.HEC-1A和Ishikawa細(xì)胞系經(jīng)

5、過(guò)0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L濃度的二甲雙胍處理24小時(shí)后其增殖率均呈下降趨勢(shì)，F(xiàn)HEC-1A=57.74，PHEC-1A<0.05，F(xiàn)Ishikawa=121.63，PIshikawa<0.05，各組之間差異均有意義，且呈濃度依賴(lài)性；
　　2.經(jīng)過(guò)0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L濃度

6、的二甲雙胍處理24小時(shí)后，RT-PCR檢測(cè)到HEC-1A和Ishikawa細(xì)胞系中脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)水平隨著二甲雙胍濃度的增加均先增加后下降，在二甲雙胍濃度為20mmol/L左右達(dá)到最大值，各組間比較，均有P<0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　3.經(jīng)過(guò)0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25 mmol/L、30mmol/L濃度的二甲雙胍處理24小時(shí)后，Western Blot檢測(cè)HEC-1A和