二甲雙胍對子宮內膜癌細胞系脂聯素表達的影響.pdf

1、背景與目的：
　　子宮內膜癌是常見的婦科惡性腫瘤，約占女性腫瘤患者的7％，且近年來其發(fā)病率有上升趨勢，嚴重危害女性健康。但是該病的發(fā)病機制目前仍然不確切，僅證明肥胖、糖尿病、高血壓及多囊卵巢綜合征(PCOS)等與其發(fā)病高度相關。肥胖特別是上腹部肥胖是子宮內膜癌的危險因素，已得到流行病學研究的支持。肥胖者體內脂肪組織可分泌較多的脂肪因子，但是僅有脂聯素的水平卻較正常人低。同時研究表明血漿中的脂聯素水平與子宮內膜癌呈負相關。而且脂聯素

2、通過與其特異性受體結合，進而抑制細胞增殖、促進細胞凋亡，這提示它有抗腫瘤的作用。脂聯素基因啟動子上游存在豐富的轉錄因子結合位點，FOXO1（叉頭框蛋白O1）能通過結合C/EBP(CCAAT增強子結合蛋白)增強脂聯素基因的轉錄。近年來研究發(fā)現，2型糖尿病的一線治療藥物二甲雙胍可糾正患者體內胰島素抵抗狀態(tài)，進而影響子宮內膜癌的發(fā)生和發(fā)展，而這一作用是通過AMPK信號通路實現的。因此，本課題擬探討在子宮內膜癌細胞系HEC-1A和Ishikaw

3、a中，二甲雙胍能否通過AMPK/mTORC1增加FOXO1的水平進而增加脂聯素的表達，為子宮內膜癌的診治提供新的思路。
　　材料：
　　本文以子宮內膜癌細胞系HEC-1A（中分化）和Ishikawa（IK，高分化)為實驗對象。兩個細胞系均由魏麗慧教授(北京大學人民醫(yī)院婦產科實驗室)惠贈。分別用含10%胎牛血清的DMEM-高糖和DMEM/F12培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞系常規(guī)傳代。
　　方法

4、　　1.CCK-8檢測二甲雙胍以不同濃度作用不同時間后，子宮內膜癌細胞系HEC-1A和Ishikawa的增殖率變化；
　　2.RT-PCR檢測二甲雙胍不同濃度處理HEC-1A和Ishikawa后，脂聯素mRNA表達水平的變化；
　　3.Western Blot檢測不同濃度二甲雙胍作用HEC-1A和Ishikawa后，FOXO1和脂聯素蛋白表達水平的變化。
　　結果：
　　1.HEC-1A和Ishikawa細胞系經

5、過0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L濃度的二甲雙胍處理24小時后其增殖率均呈下降趨勢，FHEC-1A=57.74，PHEC-1A<0.05，FIshikawa=121.63，PIshikawa<0.05，各組之間差異均有意義，且呈濃度依賴性；
　　2.經過0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L濃度

6、的二甲雙胍處理24小時后，RT-PCR檢測到HEC-1A和Ishikawa細胞系中脂聯素mRNA的表達水平隨著二甲雙胍濃度的增加均先增加后下降，在二甲雙胍濃度為20mmol/L左右達到最大值，各組間比較，均有P<0.05，差異均有統(tǒng)計學意義；
　　3.經過0mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25 mmol/L、30mmol/L濃度的二甲雙胍處理24小時后，Western Blot檢測HEC-1A和