能量限制與白藜蘆醇對U937泡沫細(xì)胞CD36、SIRT1、SIRT3表達(dá)影響的比較研究.pdf

1、背景：
　　動脈粥樣硬化性疾病已經(jīng)成為威脅人類健康的主要疾病,單核巨噬細(xì)胞源性的泡沫細(xì)胞是粥樣斑塊早期形成階段的典型病變,貫穿于動脈粥樣硬化疾病的發(fā)生發(fā)展。單核細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞上的清道夫受體 CD36能識別、內(nèi)吞氧化型低密度脂蛋白,而氧化型低密度脂蛋白又通過誘導(dǎo) CD36的高表達(dá)來刺激其對本身的攝取,形成正反饋,造成膽固醇在細(xì)胞內(nèi)不斷積累,最終導(dǎo)致泡沫細(xì)胞的形成。泡沫細(xì)胞形成后,CD36高表達(dá)能誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞向粥樣斑塊粘附聚集,

2、并參與血管壁的炎癥反應(yīng),引起動脈粥樣硬化的進(jìn)一步發(fā)展。能量限制和白藜蘆醇在許多實驗中已證實有一定的抗動脈粥樣硬化作用,而且研究證實它們均能調(diào)節(jié)沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)的表達(dá),我們希望以建立單核巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型為研究的切入點,初步探討能量限制和白藜蘆醇在調(diào)節(jié)泡沫細(xì)胞CD36方面的作用及有關(guān)機(jī)制。
　　目的：
　　初步探討能量限制(calorie restriction,CR)對于單核巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞清道夫受體

3、CD36的抑制效果及調(diào)控通路以及白藜蘆醇(resveratrol,Res)是否能完全模擬出CR效果及其原因所在,進(jìn)行對比實驗觀察CR與Res對于人U937泡沫細(xì)胞CD36和長壽基因SIRT1與SIRT3 mRNA表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.當(dāng)人 U937細(xì)胞長至1.0×106個/ml后,用終濃度為100ng/ml的佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)和終濃度為80μg/ml的人氧

4、化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激48h,油紅O染色后光鏡下可見細(xì)胞胞漿內(nèi)存在大量的脂滴,符合泡沫細(xì)胞的形態(tài)特征, U937泡沫細(xì)胞模型建立。
　　2.分別用含不同濃度白藜蘆醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞密度為1.0×106個/ml的U937泡沫細(xì)胞24小時,并利用四氮唑藍(lán)檢測法(MTT)和流式細(xì)胞計數(shù)檢測法(FCM)確定一個對于細(xì)胞損傷較小且效果最好的藥物作用濃度。
　　3.U937泡沫細(xì)胞模型建立后,隨機(jī)分為四組:分別用高糖 DM

5、EM(泡沫細(xì)胞模型組)、低糖DMEM(CR組)、高糖DMEM加白藜蘆醇(Res藥物組)、高糖DMEM加白藜蘆醇與尼克酰胺(Res藥物對照組)四種培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)泡沫細(xì)胞48小時。
　　4.分別提取各組細(xì)胞內(nèi)mRNA,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測,觀察各組間泡沫細(xì)胞清道夫受體CD36和長壽基因SIRT1、SIRT3的mRNA表達(dá)水平情況。
　　結(jié)果：
　　1.MTT和FCM的檢測結(jié)果顯示,20μM白藜蘆醇是一個比較合適的藥物作用濃

6、度。
　　2.與泡沫細(xì)胞模型組對比,CR組CD36 mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01),Res藥物組CD36 mRNA表達(dá)降低(P<0.05),Res藥物對照組CD36 mRNA表達(dá)沒有顯著變化(P﹥0.05);與Res藥物組對比,CR組CD36 mRNA表達(dá)降低(P<0.05)。
　　3.與泡沫細(xì)胞模型組對比,CR組SIRT1 mRNA表達(dá)增加(P<0.05), Res藥物組SIRT1 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.01

7、),Res藥物對照組SIRT1 mRNA表達(dá)沒有顯著變化(P﹥0.05);與CR組對比,Res藥物組SIRT1 mRNA表達(dá)增加(P<0.05)。
　　4.與泡沫細(xì)胞模型組對比,CR組SIRT3 mRNA表達(dá)增加(P<0.05),Res藥物組SIRT3 mRNA表達(dá)沒有顯著變化(P﹥0.05),Res藥物對照組SIRT3 mRNA表達(dá)沒有顯著變化(P﹥0.05);與CR組對比,Res藥物組SIRT3 mRNA表達(dá)降低(P<0.05

8、)。
　　結(jié)論：
　　1. CR能使U937泡沫細(xì)胞長壽基因SIRT1及SIRT3的mRNA表達(dá)水平上調(diào),清道夫受體CD36的mRNA表達(dá)水平下調(diào),對于泡沫細(xì)胞的發(fā)展有抑制作用。
　　2.白藜蘆醇能使長壽基因SIRT1 mRNA表達(dá)水平上調(diào),但對SIRT3 mRNA的表達(dá)水平無顯著影響,同時通過上調(diào)SIRT1的表達(dá)使U937泡沫細(xì)胞清道夫受體CD36的mRNA表達(dá)水平下調(diào)。
　　3. CR和白藜蘆醇對泡沫細(xì)胞上S