熱量限制通過SIRT1保護(hù)大鼠造影劑急性腎損傷.pdf

1、造影劑急性腎損傷(contrast induced acute kidney injury，CI-AKI)是造影的重要并發(fā)癥，其發(fā)生增加了患者醫(yī)療風(fēng)險。據(jù)統(tǒng)計，CI-AKI已成為醫(yī)源性急性腎功能不全的第3大病因，增加了院內(nèi)死亡率、透析率。雖然前期研究已發(fā)現(xiàn)一些化合物能夠保護(hù)CI-AKI，但循證醫(yī)學(xué)提示除水化療法具有一定預(yù)防作用外，目前尚無明確的防治CI-AKI的手段。由于目前碘造影劑的使用不可避免，因此開發(fā)防治CI-AKI的藥物具有重要

2、的臨床意義。
　　熱量限制(Calorie Restriction)是一種通過減少食物攝入總熱量，但不至引起營養(yǎng)不良的一種飲食控制方法。自20世紀(jì)30年代以來，熱量限制在延緩衰老和減輕衰老相關(guān)器官損傷中的作用不斷被認(rèn)識提高，其延長壽命的作用在多種生物中得到了廣泛證實。隨著近年來研究的深入，熱量限制的作用已擴(kuò)展到多種器官的保護(hù)和疾病模型。研究發(fā)現(xiàn)熱量限制對多種腎臟疾病模型如衰老相關(guān)腎損傷、糖尿病腎病、腎臟缺血再灌注損傷、順鉑誘導(dǎo)腎損

3、傷等具有保護(hù)作用。
　　熱量限制多種腎臟保護(hù)作用與沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator1，SIRT1)有關(guān)。SIRT1是一種去乙?；?，通過去乙?；喾N受體蛋白從而調(diào)節(jié)相關(guān)基因沉默，對細(xì)胞中多種生物學(xué)功能如凋亡、自噬、代謝等發(fā)揮調(diào)控作用。由于造影劑隨循環(huán)血入腎后造成髓質(zhì)缺血缺氧、氧化應(yīng)激對腎小管上皮細(xì)胞的損傷是造影劑急性腎損傷發(fā)病機(jī)制的中心環(huán)節(jié)，而前期研究發(fā)現(xiàn)熱量限制能夠在腎臟發(fā)揮抗氧化應(yīng)激

4、、抗凋亡作用，因此推測熱量限制能夠保護(hù)CI-AKI，并且這種保護(hù)作用很可能與上調(diào)腎臟SIRT1表達(dá)有關(guān)，因此設(shè)計了本課題。本研究以CI-AKI大鼠為研究對象，觀察熱量限制對大鼠CI-AKI的作用，并深入探討其機(jī)制。
　　目的：
　　觀察熱量限制對大鼠CI-AKI的作用并探討其機(jī)制。
　　方法：
　　清潔級SD大鼠，10到12周齡，雌雄各半，體質(zhì)量230±15g，分做兩組，一組自由進(jìn)食（AL組），一組大鼠給予正常日

5、進(jìn)食量60％喂養(yǎng)（CR組），兩組均自由進(jìn)水，飼養(yǎng)4周。4周后兩組大鼠根據(jù)給藥不同再分為7組：對照組（Vehicle組）、單純熱量限制組（CR組）、CI-AKI模型組（CM組）、熱量限制+CI-AKI模型組（CR+CM組）、抑制劑+熱量限制+CI-AKI模型組(EX527+CR+CM組)、白藜蘆醇+CI-AKI模型組（RES+CM組）、抑制劑+白藜蘆醇+CI-AKI模型組（EX527+RES+CM組），每組5只。分離頸外靜脈后將PE-10

6、塑料管插入。通過置管注射吲哚美辛(10mg/kg)。15min后注入L-NAME，劑量10mg/kg。再次間隔15min注入碘普羅胺，劑量1.8g(I)/kg，以此制作CI-AKI大鼠模型。EX527（10mg/kg）、白藜蘆醇(25mg/kg)間隔30min，在造模前經(jīng)腹腔注射給予。藥物注射完成后拔除大鼠頸外靜脈置管，縫合皮膚，待大鼠蘇醒后放回動物房代謝籠飼養(yǎng)24h，允許大鼠自由進(jìn)食水，收集尿液。24h后重新麻醉大鼠，取血和腎臟。測定

7、測定Scr、BUN、Ucr，計算CCr。腎臟進(jìn)行HE染色，觀察病理改變，對腎小管損傷情況進(jìn)行評定。提取腎臟組織蛋白，檢測MDA、SOD、MPO、IL-1β水平，TUNEL染色觀察腎組織凋亡情況并計數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)目，免疫熒光染色觀察腎臟組織SIRT1蛋白表達(dá)變化。Western blot檢測各組大鼠腎組織Cleaved Caspase-3、Total Caspase-3、SIRT1蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.熱量限制預(yù)處

8、理能夠改善CI-AKI大鼠腎功能，降低Scr、BUN水平，增加CCr，減輕腎臟病理損傷。
　　2.熱量限制預(yù)處理能夠減少CI-AKI大鼠腎臟細(xì)胞凋亡，降低氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)水平。
　　3.CI-AKI大鼠腎臟SIRT1蛋白表達(dá)下降，而熱量限制預(yù)處理能夠改善這種下降趨勢。
　　4.SIRT1特異性抑制劑EX527能夠部分阻斷熱量限制對CI-AKI的保護(hù)作用，而白藜蘆醇能夠模擬這種保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　熱