白藜蘆醇誘導(dǎo)的Sirt1高表達(dá)對NIT-1細(xì)胞功能及壽命的影響.pdf

1、研究目的：
　　研究Sirt1與Insulin/IGF-1信號通路中各基因表達(dá)變化的關(guān)系及其對NIT-1細(xì)胞功能及壽命的影響,為2型糖尿病(T2DM)的發(fā)病機(jī)制及防治提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料與方法：
　　用培養(yǎng)至指數(shù)生長期的胰島β瘤細(xì)胞-NIT-1細(xì)胞作為研究對象,分別用Sirt1的激活劑白藜蘆醇(Resveratrol, Re)[1]和PI3-K的阻斷劑LY294002(LY)[2]誘導(dǎo)基因變化,制作Sir

2、t1基因的高達(dá)細(xì)胞模型及PI3-K通路障礙的細(xì)胞模型,實(shí)驗(yàn)分成4組:Re組、LY組、LY加Re組及DMSO(二甲基亞砜)對照組。用RT-PCR驗(yàn)證Sirt1高表達(dá)制作成功,用測定Foxo1表達(dá)的定位變化驗(yàn)證PI3-K通路阻斷成功。用RT-PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測Sirt1、Foxo1及其下游基因p27、Bim和FasL等的表達(dá)變化,用放射免疫及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測胰島素的分泌及表達(dá)量的變化,用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞倍增時間的變化。

3、r>　　結(jié)果：
　　1、白藜蘆醇可誘導(dǎo) Sirt1表達(dá)增加,使細(xì)胞倍增周期延長;2、Sirt1通過激活 Foxo1的轉(zhuǎn)錄活性而調(diào)節(jié)其下游基因p27及Bim的表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡;3、Sirt1高表達(dá)使NIT-1細(xì)胞糖耐量增強(qiáng),并改善PI3-K/Akt通路障礙的NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌功能。
　　結(jié)論：
　　白藜蘆醇誘導(dǎo)的Sirt1高表達(dá)可延緩胰島β瘤細(xì)胞-NIT-1的衰老進(jìn)程;Sirt1表達(dá)變化后不需通過上游PI3-K