中國川芎與日本川芎的生物堿成分和抗血小板聚集作用比較.pdf

1、中國川芎和日本川芎均具有活血行氣，祛風(fēng)止痛之功效，常用于頭痛、風(fēng)濕痹痛、瘀滯腹痛、月經(jīng)不調(diào)等證。在我國的中醫(yī)和日本漢方醫(yī)學(xué)中，二者同名異物。中國川芎來源于傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根莖，日本川芎來源于傘形科植物Cnidium officinaleMakino的干燥根莖。而在我國朝鮮民族醫(yī)用藥中更是出現(xiàn)異物同用的現(xiàn)象，二者均作為“川芎”用于防病治病工作中。目前，日本川芎在中國吉林延邊地區(qū)，四川

2、彭州、漢源等地有栽培，易與中國川芎混淆。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，川芎嗪等生物堿成分是中國川芎的活性成分，抗血小板聚集作用可以反映中國川芎的“活血化瘀”功效。為此，本論文從生物堿成分及抗血小板聚集作用等方面對中國川芎和日本川芎進(jìn)行了比較研究，以期為二者的質(zhì)量評價和合理用藥提供依據(jù)。研究內(nèi)容包括如下四個方面：
　　第一、川芎嗪的比較：通過優(yōu)化供試液的制備方法和色譜條件，建立了HPLC-DAD-MS法測定中國川芎和日本川芎中川芎嗪含量的方法。從不同

3、產(chǎn)地及中藥材市場收集了26份中國川芎樣品和11份日本川芎樣品，測定川芎嗪含量。在26份中國川芎樣品中，僅6份樣品檢測出川芎嗪（平均含量為2.75μg·g-1，n=6）；在11份日本川芎樣品中，僅5份樣品檢測出川芎嗪（平均含量為1.52μg·g-1，n=5）?？梢?，中國川芎和日本川芎中川芎嗪的含量均很低，并且兩者無明顯差異。說明川芎嗪不是中國川芎和日本川芎的主要功效成分，也不宜作為其質(zhì)量評價的指標(biāo)成分。
　　第二、總生物堿的比較：通

4、過考察總生物堿含量測定的各影響因素，建立了酸性染料比色法測定中國川芎和日本川芎中總生物堿含量的方法，即：藥材粉末用酸性乙醇提取總生物堿，提取液經(jīng)堿性三氯甲烷萃取，將三氯甲烷提取物分散在7.0 mL溴甲酚綠酸性染料和4.0 mL緩沖液（pH3.6）中，再用三氯甲烷萃取；加1.00 g無水硫酸鈉至三氯甲烷提取液中，除水30 min；將三氯甲烷溶液在414 nm波長下測定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量。從不同產(chǎn)地及中藥材市場收集、測定了13份中國

5、川芎樣品和6份日本川芎樣品的總生物堿含量。結(jié)果表明，以鹽酸川芎嗪計(jì)，中國川芎總生物堿的含量（0.524％，n=13）比日本川芎總生物堿的含量（0.372%，n=6）高40.9%，說明以總生物堿為指標(biāo)，中國川芎的質(zhì)量優(yōu)于日本川芎。對不同來源的中國川芎樣品之間進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)從藥材產(chǎn)地采挖的樣品總生物堿含量（0.645%，n=9）顯著高于從藥材市場中收集的樣品（0.253%，n=4）；這可能與藥材市場收集的樣品的加工、貯藏等因素有關(guān)。此外，不

6、同產(chǎn)地中國川芎樣品中的總生物堿含量不同，都江堰(0.806%，n=3)>眉山(0.658%，n=2)>彭州(0.542%，n=3)。提示中國川芎總生物堿含量可能與產(chǎn)地有關(guān)。
　　第三、紅外光譜的比較：運(yùn)用中紅外光譜（FTIR）技術(shù)比較了中國川芎與日本川芎藥材的整體化學(xué)成分。結(jié)果表明，中國川芎（n=13）與日本川芎（n=10）的一維紅外圖譜整體峰形相似。但是，以中國川芎平均圖譜為參照圖譜，計(jì)算各樣品的相關(guān)系數(shù)；發(fā)現(xiàn)中國川芎樣品的相關(guān)

7、系數(shù)均高于日本川芎樣品；并且，這兩種藥材的二階導(dǎo)數(shù)譜在1746,1639,1079,1015和868cm-1處有差異。說明這兩種藥材的整體化學(xué)成分相近。此外，還發(fā)現(xiàn)日本川芎藥材與其加工品在1200~950 cm-1處的紅外吸收差異較大，且以日本川芎藥材平均圖譜為參照圖譜時，加工品的相關(guān)系數(shù)低于藥材。說明日本川芎藥材在加工過程中，化學(xué)成分會發(fā)生變化。
　　第四、抗血小板聚集作用的比較：通過對相關(guān)因素的考察，優(yōu)化了測定血小板抑制率的最

8、佳條件，建立了測定中國川芎和日本川芎藥材血小板抑制率的方法。即：藥材粉末用70%乙醇提取，將提取物制備成50 mg·mL-1的供試液；家兔心臟取血，血液抗凝后，離心，制備富血小板血漿（PRP）和貧血小板血漿（PPP）；PRP于室溫放置并調(diào)整血小板濃度至200×109/L，再加20μL供試液、10μL ADP溶液（500?mol·L-1），于4 h內(nèi)測定血小板聚集率，并計(jì)算對血小板聚集的抑制率。對3份中國川芎和3份日本川芎樣品血小板抑制率

9、測定結(jié)果表明，中國川芎對血小板聚集的抑制率與日本川芎相近，即：1 mg生藥的抑制率分別為29.0%（n=3）和29.5%（n=3）。說明以抗血小板聚集作用（血小板抑制率）為指標(biāo)，中國川芎和日本川芎功效相當(dāng)。對中國川芎提取物不同濃度樣品的血小板抑制率測定結(jié)果表明，醇提物、醇提后的水提物和醇水混合物（先醇提后水提的混合提取物）的樣品濃度均與血小板抑制率呈量效關(guān)系；中國川芎藥材不同溶劑提取物的血小板抑制率不同，抑制率大小依次為70%醇提物>醇