TLR4及相關(guān)炎癥因子在糖尿病大鼠心臟、肝臟和腎臟中的表達(dá).pdf

1、目的:糖尿病(diabete mellitus，DM)是一種常見(jiàn)病，其常見(jiàn)的并發(fā)癥主要發(fā)生在微血管和大血管，如糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病、冠心病等。是糖尿病致傷、致殘的主要原因。目前對(duì)并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制的研究較多，但近些年慢性炎癥反應(yīng)在并發(fā)癥中的作用受關(guān)注。其中TLR4(Tolllike receptor4，TLR4)這一普遍存在于多種免疫細(xì)胞的模式識(shí)別受體介導(dǎo)的炎癥激活可能與DM并發(fā)癥中的炎癥反應(yīng)有關(guān)。已知TLR4表達(dá)于巨噬細(xì)胞等固有性免疫細(xì)胞

2、表面，糖尿病發(fā)生時(shí)，其內(nèi)源性配體如熱休克蛋白60(HSP60)、高遷移率族蛋白1(HMGBI)增加，可激活TLR4，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。且我們前期臨床和實(shí)驗(yàn)研究中均證實(shí)高糖狀態(tài)下多種細(xì)胞TLR4的表達(dá)顯著升高，與其相關(guān)的炎癥因子IL-1β和TNF-α等的表達(dá)也升高，但是TLR4在其它臟器的表達(dá)及其相關(guān)炎癥因子的作用尚未完全清楚。因此，本課題擬制備DM大鼠模型，測(cè)定不同組織如肝臟、心臟和腎臟的TLR4及其相關(guān)炎癥因子IL-1β和TNF-α的表達(dá)

3、，以及大鼠各組織炎癥浸潤(rùn)的狀態(tài)，全面了解DM狀態(tài)下多臟器的炎癥反應(yīng)狀態(tài)，進(jìn)一步探討DM的并發(fā)癥的發(fā)生機(jī)制，為DM并發(fā)癥的抗炎治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1、制備糖尿病大鼠模型:SD雄性大鼠腹腔注射STZ(鏈脲佐菌素)，72h后取尾靜脈血測(cè)定血糖，兩次檢測(cè)濃度均大于16.7mmol/L時(shí)為造模成功。糖尿病實(shí)驗(yàn)組大鼠和正常對(duì)照組大鼠各10只。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1檢測(cè)各器官TLR4及其相關(guān)炎癥因子mR

4、NA的表達(dá):造模12周后取大鼠的腎臟、心臟、肝臟組織，Real-time PCR方法檢測(cè)TLR-4、TNF-α和IL-1β表達(dá)水平。
　　2.2檢測(cè)各組織器官炎癥浸潤(rùn)狀態(tài):制備腎臟、心臟、肝臟的組織切片，HE染色檢測(cè)炎癥各組織的炎癥細(xì)胞。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用Excel和SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均數(shù)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)來(lái)比較組間差異性，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果

5、:
　　1、成功建立了Ⅱ型糖尿病大鼠模型。
　　2、TLR4 mRNA的表達(dá)水平
　　Real-time PCR結(jié)果顯示，大鼠心臟、肝臟和腎臟的TLR4表達(dá)如下，心臟內(nèi)TLR4mRNA表達(dá)水平，在健康對(duì)照組和DM組中分別為1.104±0.189和1.079±0.503，健康對(duì)照組與DM組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;肝臟內(nèi)TLR4 mRNA的表達(dá)水平，健康對(duì)照組和DM組分別為0.933±0.275和8.899±1.769，TLR4

6、 mRNA的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組;腎臟內(nèi)TLR4 mRNA的表達(dá)水平，健康對(duì)照組和DM組分別為1.032±0.125和2.766±0.663，DM組的TLR4 mRNA水平相比健康對(duì)照組明顯升高。
　　3、IL-1βmRNA的表達(dá)水平
　　Real-time PCR結(jié)果顯示，心臟的IL-1βmRNA表達(dá)健康對(duì)照組和DM組分別為1.025±0.263和1.120±0.311，健康對(duì)照組與DM組之間無(wú)顯著差異;肝臟的IL-1β

7、mRNA表達(dá)，健康對(duì)照組和DM組分別為1.175±0.275和3.940±0.958，DM組顯著高于健康對(duì)照組;腎臟的IL-1βmRNA健康對(duì)照組和DM組分別為1.125±0.222和6.900±1.700，DM組顯著高于健康對(duì)照組。
　　4、TNF-α mRNA的表達(dá)水平
　　心臟的TNF-α mRNA表達(dá)在健康對(duì)照組和DM組分別為1.075±0.359和1.080±0.449，健康對(duì)照組與DM組之間無(wú)顯著差異;肝臟的TN

8、F-αmRNA表達(dá)在健康對(duì)照組和DM組分別為1.150±0.311和4.060±1.097，DM組顯著高于健康對(duì)照組;腎臟的TNF-0mRNA表達(dá)在健康對(duì)照組和DM組分別為1.050±0.208和10.38±1.753，DM組顯著高于健康對(duì)照組。
　　5、HE染色結(jié)果
　　心臟、肝臟、腎臟組織HE染色結(jié)果顯示:12w時(shí)，與健康對(duì)照組相比，DM組心臟心肌纖維肥大，間質(zhì)水腫，血管周有炎細(xì)胞;DM組肝臟脂肪炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)多于對(duì)照組;