TLR4在糖尿病大鼠脊髓中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：研究Toll樣受體4（TLR4）在糖尿病大鼠脊髓中的表達(dá)變化，探討TLR4與糖尿病并發(fā)癥神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)系。
　　方法：84只SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重180-200g,將大鼠隨機(jī)分為兩組：正常對(duì)照組（C組，n=42）和糖尿病組（DM組，n=42）。大鼠禁食14h后DM組按65mg/kg一次性腹腔注射PH=4.38、濃度為1％的鏈脲佐菌素（STZ）溶液，C組腹腔注射相同劑量的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液。一周后斷尾取血測(cè)血糖，空

2、腹血糖﹥16.7 mmol/L的大鼠為糖尿病模型制備成功。分別在0w、1w、2w、3w、4w、6w、8w時(shí)測(cè)定大鼠體重、血糖,用電子測(cè)痛儀測(cè)定機(jī)械痛閾，采用ⅡT336型甩尾足底測(cè)試儀測(cè)定熱痛閾。每組測(cè)定完上述指標(biāo)后隨機(jī)取6只大鼠，用10%的水合氯醛按200mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉SD大鼠，快速取L4-6節(jié)段脊髓放入液態(tài)氮中保存。通過PCR基因擴(kuò)增儀用RT-PCR法測(cè)定大鼠L4-6脊髓TLR4的相對(duì)表達(dá)量，ELISA法檢測(cè)脊髓TNF-α、

3、IL-1β的變化，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
　　結(jié)果：與制模前相比，DM組腹腔注射STZ后1w、2w、3w、4w、6w、8w時(shí)血糖濃度顯著升高，C組血糖無明顯變化；DM組腹腔注射STZ后體重逐漸下降，C組體重逐漸增加。DM組機(jī)械痛閾在2w、3w、4w呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，4w時(shí)降至最低并持續(xù)至8w,顯著低于C組(P<0．05)； DM組熱痛閾在4w明顯降低并持續(xù)至8w，低于C組（P<0．05)，但8w時(shí)熱痛閾較前又有回升，比6w時(shí)

4、顯著升高(P<0．05). DM組L4-6脊髓TLR4表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)，并且1w、2w、3w、4w呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，6w、8w又呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì),1w、2w、3w、4w、6w時(shí)TLR4表達(dá)均高于C組(P<0．05)，其中在4w時(shí)上升至最高；DM組L4-6脊髓TNF-α表達(dá)在1w、2w、3w、4w、6w、8w比C組顯著升高(P<0．05)；DM組L4-6脊髓IL-1β在1w、2w、3w、4w、6w、8w比C組顯著升高(P<0．05)。將DM組

5、所有相對(duì)定量檢測(cè)的L4-6脊髓TLR4表達(dá)與其處死前所測(cè)得的機(jī)械痛閾和熱痛閾進(jìn)行 Spearman線性相關(guān)性分析顯示：DM組0w、1w、2w、3w、4w脊髓 TLR4表達(dá)與機(jī)械痛閾呈負(fù)相關(guān)(r=-0．941)(P<0．05)，與熱痛閾負(fù)相關(guān)(r=-0.907)(P<0．05)；6w、8w脊髓TLR4表達(dá)與機(jī)械痛閾和熱痛閾無相關(guān)性。將DM組所有相對(duì)定量檢測(cè)的L4-6脊髓TLR4表達(dá)與TNF-α和IL-1β進(jìn)行Spearman線性相關(guān)性分析

6、顯示：DM組0w、1w、2w、3w、4wTLR4表達(dá)與TNF-α呈正相關(guān)(r=0．98)(P<0．05)，與IL-1β呈正相關(guān)(r=0．87)(P<0．05)；6w、8w脊髓TLR4表達(dá)與TNF-α和IL-1β無相關(guān)性。將DM組相對(duì)定量檢測(cè)的L4-6脊髓TNF-α和IL-1β的表達(dá)與機(jī)械痛閾、熱痛閾進(jìn)行Spearman線性相關(guān)性分析顯示:DM組0w、1w、2w、3w、4w、6w、8w脊髓TNF-α表達(dá)與機(jī)械痛閾成負(fù)相關(guān)(r=-0.929