用于修復放射性腸纖維化的MMP-3基因修飾干細胞的研究.pdf

1、目前，人類腫瘤的發(fā)生率極高，放射治療是其重要的醫(yī)學治療手段，然而對于腹腔、盆腔等身體部位，這種治療方式會產生一定的副作用，一定的輻射強度下會引發(fā)放射性腸炎，繼而引起腸道內細胞外基質成分（ECM）的過度沉積，發(fā)生放射性纖維化，腸纖維化的發(fā)生和發(fā)展嚴重影響患者愈后水平和生活質量。
　　基質金屬蛋白酶3（MMP-3）可以降解 ECM，是重塑組織結構的關鍵酶，進而修復腸道組織。然而體內的MMP-3表達十分有限，機體不能主動修復完全，因而大

2、量表達MMP-3可以作為放射性腸纖維化修復實驗研究的靶點。
　　本研究以小鼠軟骨RNA為模板，克隆MMP-3基因，構建EGFP標記的MMP-3慢病毒表達載體（LV-MMP-3-EGFP），修飾小鼠胚胎干細胞（ES）和骨髓來源間充質干細胞（BM-MSCs）；給予10GyX射線照射成纖維細胞（3T3），構建纖維化模型，將轉染后的干細胞與纖維化細胞共培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察GFP綠色熒光蛋白，及共培養(yǎng)后纖維化細胞的形態(tài)變化，并用Weste

3、rn Blot檢測MMP-3和TGF-β蛋白表達。
　　現(xiàn)已成功構建慢病毒表達載體LV-MMP-3-EGFP，且成功轉染GP2-293T細胞，ES細胞和BM-MSCs細胞；病毒感染的ES細胞中MMP-3蛋白表達高于對照組；病毒感染的ES細胞與3T3細胞共培養(yǎng)后，實驗組與對照組中TGF-β蛋白表達無顯著變化；病毒感染的BM-MSCs細胞與10 Gy X射線照射后的3T3細胞共培養(yǎng)后，實驗組細胞形態(tài)和細胞密度發(fā)生變化。此結果表明LV-