TGF-β-,1-基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究Ad5/CMV-TGF-β<,1>基因修飾的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞/骨膜骨塊復(fù)合移植修復(fù)關(guān)節(jié)兔關(guān)節(jié)軟骨全層缺損的效果.方法:1.通過體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法將MSCs由骨髓血中分離出來并加以純化,并進(jìn)一步在體外培養(yǎng)條件下研究其增殖及生長特性;2.構(gòu)建Ad5/CMV-TGF-β<,1>真核表達(dá)載體系統(tǒng);3.將Ad5/CMV-TGF-β<,1>基因?qū)撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染并研究TGF-β<,1>的體外表達(dá)情況;4.用Ad5/CMV-TGF-β

2、<,1>基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞/骨膜骨塊復(fù)合組織移植修復(fù)兔股骨滑車關(guān)節(jié)軟骨全層缺損,分為含基因修飾細(xì)胞組(A)和不含基因修飾細(xì)胞組(B),分別在術(shù)后4、8、12、24周取材.從大體觀、組織切片HE染色、特殊染色、免疫組化等方面了解關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)情況及TGF-β<,1>的表達(dá)情況.結(jié)果:1.在體外培養(yǎng)條件下兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增生分裂十分活躍,可以通過培養(yǎng)使其實(shí)現(xiàn)數(shù)目的擴(kuò)增;2.含有TGF-β<,1>基因cDNA的pACCMV T

3、GF-β<,1>質(zhì)粒和pJM17質(zhì)粒在腺病毒包裝細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染,可以得到含有TGF-β<,1>滴度較高的重組復(fù)制缺陷腺病毒(Ad5/CMV-TGF-β<,1>);3.Ad5/CMV-TGF-β<,1>能夠在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中成功的實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染,并得到8周左右的表達(dá);4.術(shù)后大體觀:A組在術(shù)后12周時可達(dá)到關(guān)節(jié)軟骨修復(fù),并可在術(shù)后24周得到維持.B組與A組相比較差,在術(shù)后24周時修復(fù)組織發(fā)生退變.顯微鏡下可觀察到:A組的修復(fù)組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及排列