蛋白激酶D2與Lck及ERK3相互作用功能研究.pdf

1、絲/蘇氨酸蛋白激酶D家族是新近建立的一個蛋白激酶類別。蛋白激酶D家族在眾多細(xì)胞生理過程中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞應(yīng)急反應(yīng)、蛋白運(yùn)輸以及免疫應(yīng)答等。目前對蛋白激酶D家族的生物學(xué)研究正方興未艾。PKD2是蛋白激酶D家族的一員，其功能尚待闡明。我們運(yùn)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選了與PKD2相互作用的蛋白分子，發(fā)現(xiàn)了T細(xì)胞酪氨酸激酶(Lck)和胞外信號調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)分子。 Lck是非受體酪氨酸激酶Src家族成員，在T細(xì)胞發(fā)育和

2、活化過程起著關(guān)鍵作用。我們利用免疫共沉淀實驗在T細(xì)胞中驗證了Lck和PKD2在生理狀態(tài)下相互作用。共表達(dá)的Lck能酪氨酸磷酸化PKD2并提高PKD2的激酶活性。PKD2和Lck的相互作用部位也得到了確認(rèn)，兩者的C端序列對其相互結(jié)合是必須的。此外，在T細(xì)胞受體活化的狀態(tài)下，PKD2能增強(qiáng)T細(xì)胞活化因子NFAT的活性。表明了PKD2與Lck的結(jié)合在T細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用。 胞外信號調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)是一個非典型的胞外

3、信號調(diào)節(jié)激酶。其活化環(huán)不同于一般的ERK，缺少蘇氨酸和酪氨酸殘基，擁有一段獨特的C端延伸序列。ERK3蛋白是一個不穩(wěn)定的蛋白，它的生物學(xué)活性主要依靠其蛋白穩(wěn)定性和激酶活性調(diào)節(jié)。我們發(fā)現(xiàn)PKD2與ERK3相互作用，而ERK3的NDR2結(jié)構(gòu)域?qū)τ诮Y(jié)合是關(guān)鍵地。PKD2通過與ERK3的NDR2結(jié)構(gòu)域結(jié)合，抑制了ERK3的泛素化降解，從而增高了胞內(nèi)ERK3蛋白水平。通過RT-QPCR對腫瘤組織中PKD2和ERK3的mRNA表達(dá)水平的研究，發(fā)現(xiàn)P