細胞表面膜蛋白NECL2相互作用蛋白的鑒定及其功能研究.pdf

1、細胞表面膜蛋白是溝通細胞內(nèi)部與外環(huán)境的橋梁，對于細胞行使正常的生理功能非常重要。為了在神經(jīng)系統(tǒng)中尋找能夠與蛋白4.1家族和MAGUK家族成員相互作用的細胞表面膜蛋白，我們以紅細胞表面糖脂膜蛋白GlycophorinC胞內(nèi)區(qū)為線索，克隆得到一個新的人cDNA序列，因其編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與Nectin家族成員類似，故命名為NECL2(NectinLikeProtein2)。 經(jīng)表達譜分析發(fā)現(xiàn)，NECL2在多組織中廣泛表達，如腦、心、肝

2、、肺、骨骼肌等。為了解NECL2在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用，通過原位雜交和免疫組織化學方法，研究NECL2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的具體表達情況，結(jié)果顯示NECL2主要表達于大腦皮層，海馬多形性細胞層，齒狀回，小腦蒲肯野細胞層，紋狀體、腦橋面神經(jīng)核和脊髓前角運動神經(jīng)元，而在體外原代培養(yǎng)的神經(jīng)細胞中，NECL2在神經(jīng)元的胞體和突起部位均有分布。大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞PC12具有神經(jīng)元樣分化的潛能，在PC12細胞中轉(zhuǎn)染并過量表達NECL2能夠誘導細胞發(fā)生神

3、經(jīng)元樣分化。在神經(jīng)系統(tǒng)中，蛋白4.1家族是一類重要的細胞骨架相關(guān)蛋白，我們分別通過體外蛋白結(jié)合實驗以及細胞免疫熒光共定位實驗，證明NECL2能夠與蛋白4.1家組成員DAL-1相互作用，為闡明NECL2誘導PC12細胞神經(jīng)元樣分化現(xiàn)象的機制提供了線索。 鑒于NECL2能在生物體多種組織中表達，曾經(jīng)觀察該基因在腫瘤細胞中的表型，發(fā)現(xiàn)NECL2能夠誘導急性粒性白血病細胞系NB4發(fā)生凋亡，為進一步探索該現(xiàn)象的分子機制，利用酵母雙雜交技術(shù)