選擇性多巴胺D3受體拮抗劑的篩選與評(píng)價(jià).pdf

1、目的：多巴胺D3受體(D3R)選擇性分布在藥物依賴相關(guān)的腦區(qū)，在藥物精神依賴發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用日益受到了重視，靶向D3R防復(fù)吸藥物的研究成為研究的熱點(diǎn)。目前已發(fā)現(xiàn)了80余種選擇性D3R配體，選擇性D3R拮抗劑可能在防復(fù)吸方面更具前景。但現(xiàn)有化合物尚存在一些非預(yù)期的副作用。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所七室設(shè)計(jì)合成了新的靶向D3R化合物，為了發(fā)現(xiàn)新型高選擇性D3R拮抗劑，運(yùn)用放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)上述化合物進(jìn)行了篩選，并評(píng)價(jià)其對(duì)精神依賴

2、的作用。
　　 方法：采用放射性配體受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究7種新化合物對(duì)D3R和D2R的親和力及選擇性，初篩具有高選擇性、高親和力的D3R配體。為進(jìn)一步研究其選擇性，引進(jìn)或建立了穩(wěn)定或瞬時(shí)表達(dá)多種G蛋白耦聯(lián)受體(GPCR)的細(xì)胞模型32種；采用放射性配體受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究化合物與多種受體的親和力及選擇性。采用[35S]GTPγS結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究對(duì)具有高選擇性、高親和力的一種D3R配體對(duì)Gi或Gs耦聯(lián)的GPCR的激動(dòng)或拮抗活性；采用雙

3、波長(zhǎng)激光共聚焦檢測(cè)Fluo3-AM熒光標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的方法研究化合物對(duì)Gq耦聯(lián)的GPCR的激動(dòng)或拮抗活性。
　　 通過(guò)分析化合物靜脈和口服給藥后的大鼠血漿藥時(shí)曲線計(jì)算化合物的大鼠生物利用度等參數(shù)，并觀察化合物在大鼠肝微粒體中的穩(wěn)定性。
　　 在體藥效學(xué)研究，首先觀察化合物單藥單次給予對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響，在不影響小鼠自發(fā)活動(dòng)的前提下，選擇合適的藥物劑量，觀察候選化合物對(duì)嗎啡誘導(dǎo)小鼠行為敏化表達(dá)期的影響并評(píng)價(jià)候選化合

4、物的抗阿片依賴潛能。
　　 結(jié)果：
　　 1、GPCR表達(dá)系統(tǒng)的建立：引進(jìn)和建立了32種GPCR的瞬時(shí)及穩(wěn)定的表達(dá)體系。
　　 2、化合物對(duì)D2R，D3R結(jié)合特性的研究：采用放射性配體結(jié)合試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，化合物Y-QA31對(duì)D3R表現(xiàn)出極高的親和力(Ki=12.1±0.40pmol·L-1)，對(duì)D2R的親和力為Ki=32.75±0.35nmol·L-1,Y-QA31對(duì)D3R的親和力比D2R高2690倍，優(yōu)于目前與D

5、3R親和力較好的化合物SB-277011A和NGB2904。
　　 3、化合物的受體選擇性研究：Y-QA31與多數(shù)GPCR的親和力很低，ICs0超過(guò)10μM，對(duì)D3R選擇倍數(shù)超過(guò)1000倍；Y-QA31與組胺H1受體(IC50=568.5±0.1nM)，α1A（IC50=86.3±1.2nM）及α,1B（IC50=170.8±3.2nM）腎上腺素受體具有中等親和力，對(duì)D3R的選擇倍數(shù)接近100倍；與5-HT1A受體具有較高親和力

6、（IC50=3.5±0.2nM），對(duì)D3R的選擇倍數(shù)小于100倍。
　　 4、化合物對(duì)多巴胺系統(tǒng)受體的作用性質(zhì)研究：在[35S]GTPγS結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，Y-QA31(10-10-10-5M)在穩(wěn)定表達(dá)hD3R的細(xì)胞模型上沒有激動(dòng)活性，抑制激動(dòng)劑喹吡羅（10μM）的激動(dòng)活性；在穩(wěn)定表達(dá)hD2R的細(xì)胞模型上，多次實(shí)驗(yàn)觀察到Y(jié)-QA31(10-6-10-5M)有約30％的激動(dòng)，不能排除Y-QA31對(duì)D2R的部分激動(dòng)性質(zhì)；抑制激動(dòng)劑喹吡羅

7、（10μM）的激動(dòng)活性。Y-QA31對(duì)D3R、D2R具有阻斷作用。
　　 5、化合物對(duì)非多巴胺系統(tǒng)受體作用性質(zhì)研究：Y-QA31在大鼠海馬組織的膜蛋白上沒有激動(dòng)活性，抑制5-HT1A選擇性激動(dòng)劑8-OH-DPAT(10μM)對(duì)5-HT1A受體的激動(dòng)活性，表明Y-QA31對(duì)5-HT1A受體具有阻斷作用。Y-QA31拮抗去甲腎上腺素(NA)引起的hα1AR-HEK293細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放，對(duì)α1A受體具有阻斷作用；Y-QA31

8、較弱的抑制α,1B受體和組胺H1受體激動(dòng)劑的激動(dòng)效應(yīng)，具有較弱的阻斷作用。
　　 6、初步藥代動(dòng)力學(xué)研究：Y-QA31的口服生物利用度約為44.48％，在大鼠微粒體中表現(xiàn)穩(wěn)定。
　　 7、化合物的在體藥理作用研究：Y-QA31（3.125-12.5mg·kg-1）不影響小鼠的自發(fā)活動(dòng)，Y-QA31(6.25-12.5mg·kg-1)劑量依賴性地抑制嗎啡誘導(dǎo)的行為敏化的表達(dá)。
　　 結(jié)論：Y-QA31為新型高選擇性