氯喹對(duì)銀屑病樣皮炎治療作用的研究.pdf

1、研究背景：
　　銀屑病是一種由多基因遺傳決定的、多環(huán)境因素刺激誘導(dǎo)的免疫異常性慢性炎癥性增生性皮膚病。其組織病理學(xué)特征為角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖與分化異常、伴顯著的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。新的研究結(jié)果表明銀屑病是多因素作用的T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，但是其具體的發(fā)病機(jī)理仍不清楚。氯喹是皮膚科較為常用的治療紅斑狼瘡、皮肌炎等光敏性疾病的藥物，口服后可引起銀屑病加重或復(fù)發(fā)因此而成為銀屑病的禁忌藥物。但由于氯喹是漿樣樹(shù)突狀細(xì)胞（pDC）的抑制劑，已

2、有許多研究證實(shí)其具有治療AIDS、自身免疫性疾病等pDC起致病作用的疾病的潛在作用，而銀屑病也是一種pDC的活化及功能起重要作用的疾病。為解開(kāi)這一矛盾現(xiàn)象背后的本質(zhì)，我們利用咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型研究氯喹的外用劑型（氯喹霜）對(duì)銀屑病皮損是否具有治療作用以及其可能的作用機(jī)理。進(jìn)而試圖發(fā)現(xiàn)一種比較有效并且安全的治療方法，同時(shí)在一定程度上探究銀屑病可能的發(fā)病機(jī)理。
　　第一部分外用咪喹莫特引起小鼠銀屑病樣皮損
　　目的：觀察

3、外用IMQ是否能誘導(dǎo)比較理想的銀屑病小鼠模型。
　　方法：6-8周齡的BALB/c小鼠，每日外用IMQ乳膏或載體乳膏。4天后取局部皮膚行HE染色及免疫組化，觀察皮膚厚度及T細(xì)胞（CD3抗體）、pDC（120G8抗體）和中性粒細(xì)胞（Gr-1抗體）數(shù)量和定位
　　結(jié)果：
　　1、IMQ組小鼠在用藥2天后開(kāi)始出現(xiàn)紅斑、鱗屑。
　　2、IMQ組小鼠的表皮明顯增厚，由對(duì)照組的20-30μm增加為80-150μm，棘細(xì)胞由2

4、-3層增加至10層左右。
　　3、IMQ可引起T細(xì)胞，pDC及中性粒細(xì)胞在皮膚的浸潤(rùn)。
　　4、IMQ組的皮膚出現(xiàn)明顯的角化過(guò)度、角化不全和真皮血管擴(kuò)張。
　　結(jié)論：外用IMQ能引起小鼠用藥部位銀屑病樣的皮損。
　　第二部分氯喹抑制咪喹莫特所致的小鼠銀屑病樣皮損
　　目的：觀察氯喹霜是否能影響IMQ引起的銀屑病樣皮損。
　　方法：在外用IMQ的同時(shí)（早期干預(yù)組）或3天后（中期干預(yù)組）開(kāi)始使用氯喹霜；另

5、一組始終外用IMQ(陽(yáng)性對(duì)照組)。4天后取皮膚行HE染色及免疫組化，觀察各組皮膚厚度及T淋巴細(xì)胞，pDC及中性粒細(xì)胞等細(xì)胞的浸潤(rùn)。
　　結(jié)果：
　　1、氯喹早期干預(yù)組小鼠未出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的紅斑、鱗屑。
　　2、氯喹中期干預(yù)組小鼠出現(xiàn)明顯紅斑、鱗屑，并且在外用氯喹后有所減輕。
　　3、氯喹早期干預(yù)組小鼠的皮膚厚度較IMQ組明顯變薄。
　　4、氯喹早期干預(yù)小鼠T細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少，中性粒細(xì)胞及pDC的浸潤(rùn)較IMQ

6、組無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1、氯喹霜能夠抑制咪喹莫特所致的小鼠銀屑病樣皮損，而且可以減輕已經(jīng)發(fā)生的銀屑病樣皮損。
　　2、氯喹霜能引起阻止IMQ引起的T細(xì)胞向皮膚的浸潤(rùn)。
　　第三部分氯喹抑制咪喹莫特效應(yīng)的作用機(jī)制探討
　　目的：探討氯喹的上述作用是通過(guò)什么機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)。
　　方法：1利用抗小鼠Siglec-H,B220,CD3,Gr-1,CD45等抗體對(duì)各組的PBMC及脾臟進(jìn)行流式細(xì)胞法檢測(cè)。2

7、利用逆轉(zhuǎn)錄-定量PCR方法檢測(cè)小鼠皮膚及脾臟中IFN-α基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、咪喹莫特處理后小鼠外周血中可見(jiàn)pDC和T細(xì)胞比例均明顯減少，而中性粒細(xì)胞無(wú)明顯變化。
　　2、氯喹早期干預(yù)組的外周血中pDC和T細(xì)胞比例無(wú)明顯變化，而中性粒細(xì)胞比例稍升高。
　　3、用藥4天后，各組小鼠之間皮膚的IFN-α基因表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：氯喹很可能不是通過(guò)作用pDC或IFN-α抑制咪喹莫特的效