癲癇持續(xù)狀態(tài)幼鼠海馬神經元凋亡及NGF的干預作用研究.pdf

1、背景：
　　癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)是臨床科室尤其是小兒神經內科十分常見的急癥，國際抗癲癇聯盟的傳統定義一次癲癇持續(xù)30分鐘以上，或反復多次發(fā)作持續(xù)30分鐘，且發(fā)作間期意識不能恢復至發(fā)作前基線狀態(tài)。相關動物實驗證實,SE30分鐘后腦神經就開始大量的死亡，而細胞凋亡是其主要的形式之一，細胞凋亡在腦神經元死亡的過程中扮演著極其重要的作用。
　　1972年Kerr等首次提出了細胞凋亡的概念，根據細胞的超微結構的不同特征，把細胞死亡分為

2、壞死和凋亡兩種方式。早期對神經細胞凋亡的研究大多集中在神經元的正常發(fā)育過程。大量研究表明，神經元的凋亡與顱腦損傷后存活的細胞數目有著直接關系，并對腦損傷后的預后產生十分重要影響，因而進一步認識神經細胞的凋亡極具重要性。神經細胞的凋亡的發(fā)生與否主要取決于抗凋亡因素的抑制及凋亡誘導因素的激發(fā)這兩方面的綜合作用。半胱氨酸天冬酶家族（Caspase）的激活與抑制在細胞的凋亡的三條凋亡通路中都有涉及，該蛋白酶系統位于許多凋亡路徑的交點，導致了凋亡

3、細胞解體。抗凋亡蛋白家族中較為獨特的是人類凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisproteins,IAPs），其中的X-IAP是唯一可與凋亡啟動因子Caspase-9及效應因子Caspase-3相結合的抗凋亡蛋白。亦有證據表明Caspase-9和Caspase-3的激活、細胞色素C的釋放參與了腦缺血誘導的神經細胞凋亡。已有大量文獻報道：神經生長因子（Nervegrowthfactor,NGF）對損傷后的神經功能恢復能起到

4、積極促進的作用。韓貴和等研究發(fā)現：NGF對正常神經細胞凋亡有抑制作用，能夠增強神經細胞的抗損傷能力。但是，針對SE致發(fā)育中腦損傷細胞凋亡的靶點開發(fā)特異性神經保護藥物是世界眾多神經科學研究人員關注的熱點和努力的方向，目前國際國內并沒有實質性突破。
　　目的：
　　本實驗采用對幼鼠腹腔注射氯化鋰、匹羅卡品建立氯化鋰-匹羅卡品癲癇模型，觀察各組實驗幼鼠海馬區(qū)神經細胞的病理形態(tài)改變及Caspase3、Caspase9和XIAP的表達

5、的關系，并研究NGF對其干預作用，進而找到上游的靶點并為臨床治療提供理論依據。
　　方法：
　　1.將3~4周齡（25日齡）健康雄性SD幼鼠隨機分為三大組，9個亞組。①正常對照組（normalgroup,NG）；模型組（statusepilepticsgroup,SG）：②SE后4h組,③SE后8h組,④SE后24h組,⑤SE后72h組；NGF組：⑥NGF后4h組,⑦NGF后8h組,⑧NGF后24h組,⑨NGF后72h組。<

6、br>　　2．用TUNEL法檢測不同時間點海馬區(qū)的細胞凋亡，用SP免疫組化法檢測海馬區(qū)神經細胞Caspase3、Caspase9、XIAP的蛋白表達情況。
　　結果：
　　1.正常組偶見TUNEL陽性細胞，SE組8h后TUNEL陽性細胞表達開始明顯增多,在72h達峰值。NGF組與SE組陽性細胞數的變化趨勢基本相同,但其數量明顯較SE組少。
　　2.正常對照組海馬各區(qū)內僅見少量細胞核或胞漿黃染的陽性細胞表達；與對照組相比

7、，SE組表達顯著增多，隨時間推移而增加，24h時染色深度及陽性細胞數目達高峰,其細胞排列明顯較正常紊亂，細胞核固縮、破碎，72h時稍減少。NGF組的Caspase3變化趨勢與SE組基本相同,在相應時間點較SE組均顯著減少。Caspase9的表達及陽性細胞特點與Caspase3相似，在SE組其表達趨勢及峰值亦基本一致，NGF組中Caspase9蛋白表達在24h、72h顯著減少SE組。
　　3.XIAP海馬區(qū)XIAP陽性細胞為細胞核或

8、胞漿黃染，對照組偶見陽性細胞；SE組XIAP陽性細胞數目較對照組明顯增多，染色程度較其加重，在4小時表達開始增多，8小時達到峰值，之后略減少；NGF組XIAP蛋白表達的趨勢與SE組一致，但NGF組XIAP蛋白表達均顯著多于SE組。
　　結論：
　　1.癲癇持續(xù)狀態(tài)可引起海馬區(qū)神經細胞的凋亡，在急性期內，隨著時間的延遲，發(fā)生凋亡的細胞越多，腦損傷越重。
　　2.細胞凋亡的發(fā)生與caspase3、caspase9的激活有關