小鼠胚胎心肌細(xì)胞ATP敏感性鉀通道(KATP)的發(fā)育依賴性研究.pdf

1、目的：探討小鼠胚胎心肌細(xì)胞ATP 依賴性鉀通道（KATP）隨著胚胎的發(fā)育在心肌細(xì)胞上的表達(dá)、電生理學(xué)特點(diǎn)及其功能的變化。
　　 方法：分離第10.5天和第17.5天的小鼠胚胎，采用膠原酶B 消化獲得單個(gè)胚胎心肌細(xì)胞并培養(yǎng)24-36 小時(shí)。以Pinacidil和Cromacalim 作為KATP 通道的特異性開放劑，Glibenclamide 作為通道的特異性抑制劑，采用電流鉗模式記錄細(xì)胞的動(dòng)作電位觀察IKATP 功能的發(fā)育依賴性

2、變化；使用全細(xì)胞電壓鉗模式（細(xì)胞外液K+濃度為140mM，鉗制電位0mV，測(cè)試脈沖為-100 到+40mV，步階為20mV，持續(xù)時(shí)間500ms），記錄心肌細(xì)胞的KATP 電流（IKATP）觀察其電生理學(xué)特點(diǎn)的發(fā)育依賴性變化。采用RT-PCR的方法分析KATP 亞單位Kir6.1和Kir6.2以及調(diào)節(jié)亞單位SUR1、SUR2A在早晚期心肌細(xì)胞上的表達(dá)量的發(fā)育依賴性變化。
　　 結(jié)果：電流鉗的數(shù)據(jù)表明，IKATP 特異性開放劑Pin

3、acidil 使早期的大部分心房和心室肌的動(dòng)作電位時(shí)程縮短，對(duì)動(dòng)作電位的最大舒張期電位沒有影響；但是使晚期胚胎心肌細(xì)胞的動(dòng)作電位的膜電位產(chǎn)生超極化。電壓鉗的數(shù)據(jù)表明，早晚期胚胎心肌細(xì)胞的IKATP的電流密度沒有顯著差異，但是早期心肌細(xì)胞IKATP的內(nèi)向整流特性明顯強(qiáng)于晚期心肌細(xì)胞。Kir6.1、Kir6.2、SUR1和SUR2在mRNA水平的表達(dá)隨著發(fā)育均有上調(diào)趨勢(shì)，發(fā)育晚期以Kir6.2和SUR2表達(dá)占優(yōu)勢(shì)。
　　 結(jié)論：隨著