促紅細(xì)胞生成素通過(guò)PI3K-Akt和Erk1-2信號(hào)通路對(duì)缺氧缺糖誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究Epo對(duì)缺氧缺糖神經(jīng)元減少凋亡的保護(hù)作用及其相關(guān)信號(hào)通路機(jī)制。
　　方法：乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)并進(jìn)行map2免疫熒光鑒定。建立神經(jīng)元OGD損傷模型，流式細(xì)胞儀（AnnexinV/PI染色法）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率鑒定模型。加入不同濃度的Epo干預(yù)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各濃度Epo作用下細(xì)胞凋亡率，尋找最佳Epo干預(yù)濃度。實(shí)驗(yàn)分組：①對(duì)照組：正常皮質(zhì)神經(jīng)元；②模型組：OGD損傷模型；③Epo組：OGD損傷模型+Epo（最佳濃度）；

2、④LY294002組：OGD損傷模型+Epo+LY294002（PI3K-Akt通路阻斷劑）；⑤U0126組：OGD損傷模型+Epo+U0126（Erk1/2通路阻斷劑）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率，Rt-PCR檢測(cè)各組Bax、Bcl-2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，Western blot檢測(cè)各組Akt、p-Akt、Erk、p-Erk和Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1. Epo可以降低神經(jīng)元OGD損傷模型

3、的細(xì)胞凋亡率（P<0.05），并且在Epo濃度為12.5U/ml時(shí)的保護(hù)作用最強(qiáng)（P<0.05）。2. OGD組相較于對(duì)照組細(xì)胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA、Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)（P<0.05）；Akt、Erk、Bcl-2蛋白表達(dá)無(wú)差異（P>0.05），p-Akt表達(dá)下降，p-Erk、Bax和Caspase-3表達(dá)上升（P<0.05）。3. Epo組相較于OGD組Bax mRNA轉(zhuǎn)錄減弱，Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄

4、增強(qiáng)（P<0.05）；Akt、Erk蛋白表達(dá)無(wú)差異（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表達(dá)上升，p-Erk、Bax和Caspase-3表達(dá)下降（P<0.05）。4. LY294002組相較于Epo組細(xì)胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄減弱（P<0.05）；Akt蛋白表達(dá)無(wú)差異（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表達(dá)下降，Bax和Caspase-3表達(dá)上升（P<0.05）。5. U01